Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Анализ штрих-кодирования для фенотипической и функциональной характеристики иммунных клеток

780 просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Baxter, R. M., et al. Одноклеточный анализ иммунофенотипа и продукции цитокинов в периферической цельной крови с помощью масс-цитометрии. J. Vis. Exp. (2018).

В этом видео рассказывается об одноклеточном протеомном методе, в котором используются антитела, конъюгированные с тяжелыми металлами, для штрихкодирования различных клеток. Затем применяется иммуноокрашивание и массовая цитометрия для оценки иммунных фенотипических и функциональных изменений в иммунных клетках цельной крови человека.

Протокол

1. Штрих-код лизированных/фиксированных клеток крови

  1. Медленно размораживайте лизированные/фиксированные образцы клеток из хранилища при температуре -80 °C на льду; максимум 20 образцов могут быть помечены уникальными штрих-кодами и объединены с помощью этой системы. Разбавьте буфер для химической завивки 10X штрих-кодирования в соотношении 1:10 с PBS; сделайте достаточный буфер для ~3 мл на образец.
  2. Заполните одно нестерильное корыто с помощью CSM и одно с помощью буфера для завивки с штрих-кодированием 1X. Добавьте 1 мл ледяного CSM в только что размороженные образцы, тщательно перемешайте пипеткой и переложите в соответствующие....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
РуксолитинибСанта-КрусSC-364729AИсходный конк: 10 мМ; Итоговая консекция: 5 мкМ
Р848ИнвивогенТЛРЛ-Р848-5Консультация запаса: 1 мкг/мкл; Итоговый конс: 1 мкг/мл
ЛПС-ЭКИнвивогенTLRL-EKLPSКонсультация запаса: 1 мкг/мкл; Итоговая конкуренция: 0,1 мкг/мл
Стерильный PBSЛонза17-516Ф
Lyse/Fix BufferBD бионауки558049Исходный конс: 5X; Итоговый конс: 1X (разбавленный в ddH2O)
BD Phosflow буфер для перманентной завивки/промывки IBD бионауки557885Стоковый конс: 10X; Итоговое значение: 1:10 (разбавленное в ddH2O)
РПМИGibco21870-076
Азид натрия (NaN3)Сигма-ОлдричС-8032Стоимость акций: >99,9%; Итоговая конуссия: 0.0002
Ингибитор переноса белка (PTI)Электронные биологические науки00-4980-93 (Английский)Стоковый конс: 500X; Итоговый конс: 1X
Интеркалятор ДНКФлюидигм201192БКонс. приклада: 500 μM; Итоговая консекция: 0,1 мкМ
MaxPar Буфер для перманентной завивки с штрих-кодомФлюидигм201057Стоковый конс: 10X; Итоговый конс: 1X
Набор штрих-кодов Pd 20-plexФлюидигмС0014Стоимость акций: н/д; Итоговое условие: н/д
Антитела, используемые для масс-цитометрии
Маркеры поверхностей
CD1cБиолегендаЛ161Масса: 161
CD3БДUCHT1Масса: 144
СД4БиолегендаСК3Масса: 174
СД7БДМ-Т701Масса: 149
СД8БиолегендаСК1Масса: 142
CD11bФлюидигмICRF44Масса: 209
CD11cБДВ-ly6Масса: 152
СД15БДHI98Масса: 115
СД14БиолегендаМ5Е2Масса: 154
СД16eBioscience/ThermoВ73.1Масса: 165
СД19Санта-КрусСДЖ25С1Масса: 163
СД21БиолегендаБу32Масса: 141
СД27БДЛ128Масса: 155
СД38ФлюидигмХИТ2Масса: 172
Всего CD45БиолегендаХИ30Масса: 89
CD45RAБиолегендаХИ100Масса: 153
КД56МилтеньиРЕА196Масса: 168
КД66БДВ1.1/CD66Масса: 113
КД86ФлюидигмИТ2.2Масса: 150
КД123Флюидигм6Н6Масса: 143
CD278/ICOSБиолегендаС398.4АМасса: 156
КД179/ПД1БиолегендаЭХ12.2Н7Масса: 162
IgDБиолегендаИА6-2Масса: 146
IgMБиолегендаМХМ-88Масса: 151
КХКР5БДРФ8Б2Масса: 173
HLADRБиолегендаЛ243Масса: 167
Цитокины
ИЛ-1αБиолегенда364-3Б3-14Масса: 147
ИЛ-1βБиолегендаН1б-98Масса: 169
Ил-1РАСанта-КрусАС17Масса: 157
Ил-6БиолегендаМКВ2-13А5Масса: 164
Ил-8БДЕ8Н1Масса: 160
Ил-12/Ил-23П40БиолегендаС8.6Масса: 171
Ил-17АБиолегендаБЛ168Масса: 148
ИЛ23п19eBioscience/Thermo23dcdpМасса: 176
МИП1βБДД21-1351Масса: 158
МКП1БД5Д3-F7Масса: 170
ИФНαМилтеньиЛТ27:295Масса: 175
ИФНγБиолегенда4С.В3Масса: 165
PTENБДА2В1Масса: 159
ФНОαБиолегендаМаб11Масса: 166
Примечание: Если производитель указан как Fluidigm, то это антитело было приобретено у Fluidigm с предварительно конъюгированным металлом. Если производитель указан как не Fluidigm, то это антитело было самоконъюгировано с использованием набора для маркировки Multi-Metal Labeling Kit MaxPar (Fluidigm Cat: 201300) в соответствии с протоколом производителя.

Больше статей

Масс-цитометрияизотопы тяжелых металловклеточное баркодированиеанализ иммунных клетококрашивание поверхностных антигеноввнутриклеточное окрашивание цитокиновпериферическая цельная кровьфенотипическая характеристикапротеомика единичных клеток