Методическая статья

Молекулярный анализ для количественного определения вирусов гриппа А и В

857 просмотров

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Otto, C. C. et al., Быстрое молекулярное обнаружение и дифференциация вирусов гриппа A и B. J. Vis. Exp. (2017)

Видео демонстрирует анализ для количественного определения вирусов гриппа A и B. В этом анализе используется амплификация эндонуклеазы с помощью специфичных для гриппа праймеров и обнаружение мишени с помощью молекулярных зондов-маяков.

Протокол

Все процедуры, связанные со сбором образцов, были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.

1. Перед проведением анализа

ПРИМЕЧАНИЕ: Анализ на грипп А и В одобрен для образцов мазков из носоглотки и мазков из носоглотки, хранящихся в вирусных транспортных средах. Тампоны входят в комплект и должны использоваться для оптимальной работы. Тем не менее, для сбора образцов мазков из носа также можно использовать вискозу, пенопласт, флокированные тампоны или тампоны из полиэстера.

  1. Чтобы взять образец мазка из носа, вставьте тампон в ноздрю, которая имеет наиболее заметные выделения или наиболее заложена. При мягком вращении протолкните тампон в ноздрю до тех пор, пока не будет достигнуто сопротивление, и несколько раз поверните его против носовой стенки, прежде чем медленно извлечь его из ноздри. Храните тампоны и транспортируйте их во флаконах, содержащих 3 мл вирусной транспортной среды (VTM).
    ПРИМЕЧАНИЕ: Необходимо уделять пристальное внимание правильному сбору образцов, так как недостаточный сбор образцов может привести к ошибочным результатам.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы мазков должны быть протестированы как можно скорее после сбора. Тем не менее, они могут храниться при комнатной температуре до 2 часов или в холодильнике при температуре 2-8 °C в течение 24 часов, если тестирование не доступно немедленно. Свежесобранные образцы идеально подходят для оптимальных результатов испытаний. Неправильное обращение, хранение и/или транспортировка образцов могут привести к ошибочным результатам.
    ПРИМЕЧАНИЕ: В качестве меры предосторожности лица, выполняющие этот тест, должны относиться ко всем образцам как к потенциально инфекционным, соблюдая универсальные меры предосторожности при работе с образцами.
  2. Перед тестированием доведите все образцы до комнатной температуры.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Все тестовые компоненты предназначены только для однократного использования и не должны использоваться для проведения нескольких тестов. Не смешивайте компоненты набора из разных номеров партий. Не используйте реактивы из наборов с истекшим сроком годности.
  3. Перед тестированием доведите синий приемник образцов до комнатной температуры. Оранжевую тестовую базу можно тестировать без необходимости нагрева до комнатной температуры.
  4. Оставьте все тестовые образцы в пленке из фольги непосредственно перед использованием. Включите прибор, нажав кнопку питания на боковой стороне прибора. Введите идентификатор пользователя и нажмите «OK».

2. Выполнение теста

  1. Чтобы начать процесс тестирования, нажмите «Запустить тест» на экране прибора. Введите идентификатор пациента с помощью экранной клавиатуры или сканера штрих-кода и нажмите «OK». Откройте крышку и вставьте тестовую базу Orange в держатель тестовой базы Orange.
  2. Убедитесь, что на экране отображается правильный тест, и нажмите «OK». Вставьте синий приемник образцов в держатель синего приемника образцов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Не открывайте приемник проб перед установкой его в прибор, так как это не позволит буферу элюирования достичь правильной рабочей температуры и может повлиять на результаты испытаний.
  3. Подождите, пока приемник образцов прогреется. По предложению прибора снимите защитную пленку из фольги и поместите тампон пациента для тестирования в приемник образцов.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Снимая фольгу, положите два пальца на край приемника образцов, чтобы убедиться, что он остается на месте.
  4. Энергично перемешивайте тампон в жидкости в течение 10 секунд, прижимая головку тампона к боковой стороне приемника образцов во время смешивания, чтобы помочь выбить образец из тампона. Нажмите «ОК», чтобы продолжить. Если тестовые тампоны хранятся в вирусной транспортной среде, проведите вихревое воздействие VTM в течение 10 секунд, а затем добавьте 200 мкл в приемник образцов.
  5. Вставьте белый картридж для переноса в синий приемник образцов. Продолжайте нажимать на приемник образца, пока не загорится оранжевый индикатор.
  6. Поднимите, а затем подсоедините картридж для переноса к испытательной базе. Обратите внимание на оранжевый индикатор, опускающийся после того, как перенос картриджа будет прикреплен правильно. Закройте крышку и не открывайте, пока на экране не появится сообщение «Тест завершен».

3. Контроль качества (QC)

  1. Нажмите «Запустить тест контроля качества» на главном экране. Выберите тест контроля качества, который нужно выполнить. Подтвердите соответствие типа теста образцу контроля качества, предназначенному для тестирования, нажав «OK» и следуя инструкциям на экране, чтобы завершить тестирование.

4. Интерпретация результатов

  1. После завершения тестового прогона наблюдайте за результатами теста, отображаемыми на экране, с интерпретацией на наличие гриппа А, В и неизвестных подтипов. Если результаты неверны, повторите тест.

5. Обслуживание и чистка

  1. Ежедневно очищайте инструмент и прилегающую область стола 70% этанолом или 10% раствором отбеливателя. Распылите чистящий раствор на влажную ткань без ворса для очистки. Не выливайте растворы непосредственно на инструмент.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Alere i InstrumentАлереNAT-000 (международный), NAT-024 (американский)
Набор для тестирования Alere i Influenza A & B 24Алере425-000 (международный), 425-024 (США)
Сканер штрих-кодов Alere iАлереEQ001001
Универсальный принтер AlereАлере55115 (Глобальный), alereiprinter (США)
Прецизионный дозатор объемом 200 мкл
Одноразовые наконечники для пипеток объемом 200 мкл
Вирусная транспортная средаРемельМ4-РТ

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи