Определение противовирусной эффективности экспериментальных препаратов с помощью анализа бляшек

Аннотация

Источник: Yadavalli, T., et al. Эксплант ткани роговицы свиньи для изучения эффективности противовирусных препаратов против вируса простого герпеса-1. J. Vis. Exp. (2021)

Это видео демонстрирует метод проведения анализа бляшек с использованием вируса, полученного из инфицированной роговицы свиней. Роговица свиньи используется для проверки противовирусной эффективности экспериментальных препаратов.

Протокол

1. Количественная оценка вирусной инфекции

ПРИМЕЧАНИЕ: Титры вирусов из роговицы свиней следует оценивать каждый день, чтобы проанализировать эффект медикаментозного лечения.

1. Для количественного определения вируса засейте клетки Vero с плотностью 5 x 10⁵ клеток на лунку, если использовать 6-луночный планшет, как это было сделано в этом эксперименте. Сделайте это за сутки до заражения. Инкубируйте пластинчатые клетки в течение ночи, чтобы убедиться, что они сливаются для количественного определения вируса.
2. Аквотируйте 500 мкл бессывороточной среды в несколько микроцентрифужны....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
30 г игл для подкожных инъекций.	БД	305128
Стеклянная бутылка объемом 500 мл.	Томас Сайенти	844027
Шкаф биобезопасности с сертификацией Bio-Safety Level-2 (BSL-2).	Thermofisher Scientific	Герасейф 2030i
Calgiswab 6" стерильный альгинат кальция стандартные тампоны.	пуританин	22029501
Скребок для ячеек - 25 см	Биологикс БЭ	70-1180 70-1250
Центрифужная трубка
Кристально-фиолетовый	Сигма Олдрич	С6158	Храните порошок в защищенном от света месте
Модифицированная среда Дульбекко Eagle's - DMEM	GIBCO	41966029	Хранить при температуре 4 °C до использования
этанол	Сигма Олдрич	Е7023
Фетальная бычья сыворотка -FBS	Сигма Олдрич	Ф2442	Аликвоту в пробирки объемом 50 мл и хранить в замороженном виде до использования
Элементы Vero	Коллекция американской типовой культуры ATCC	КРЛ-1586
Вихревая машина
метанол
Метилцеллюлоза
Микроцентрифужная пробирка
Свиная роговица	Park Packaging Co., Чикаго, Иллинойс		Специальный заказ по запросу
Процедура изготовления чехлов на столе - по мере необходимости.	Thermofisher Scientific	С42400
Серологические пипетки	Томас Сайенти	П7132, С7127, С7128, С7129, С7137
Оборудование для серологического пипетирования.	Томас Сайенти	Ezpette Pro
стереоскоп	Карл Цейсс	SteREO Discovery V20
Колбы для культуры тканей, T175 см2.	Томас Сайенти	Т1275
Инкубаторы для культивирования тканей, которые могут поддерживать температуру 5% CO2 и 37 °C	Thermofisher Scientific	Форма 50145523
Культивирование тканей обрабатывают планшетами (6-луночные).	Томас Сайенти	Т1006
трипсин