Методическая статья

Обнаружение бактериального загрязнения с помощью магнитофлуоресцентных наносенсоров

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Шелби, Т., Султана, С., Макафи, Д., Банерджи, Т., Сантра, С. Скрининг патогенов пищевого происхождения с использованием магнитофлуоресцентного наносенсора: быстрое обнаружение E. coli O157:H7. J. Vis. Exp. (2017).

Это видео демонстрирует метод обнаружения бактериальных загрязнителей в образцах пищи и воды с помощью наносенсоров. Целевые патогенные бактерии обнаруживаются с помощью комбинации магнитной релаксации и флуоресцентного излучения.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Быстрое обнаружение E. coli O157:H7 с помощью MFnS

  1. Добавляйте в различные растворы PBS (1X, pH 7,4, 300 μL) увеличивающиеся количества 10-6 бактериального запаса, в результате чего КОЕ находятся в диапазоне от 1 до 100. Добавляйте в эти растворы постоянное количество MFnS (100 μL).
  2. Создайте один исходный раствор, содержащий только PBS (1X, pH 7,4, 300 μL) и MFnS (100 μL).
  3. Инкубируйте растворы в течение 30 минут при 37 °C, а затем дайте им остыть до комнатной температуры.
  4. Переносите отдельные растворы на магнитный релаксометр (0,47 Тесла) и записывайте изменения времени релаксации (T2) относительно КОЕ в каждом растворе.
    1. Чтобы записать изменения значений T2, начните с измерения значения T2 базового решения, содержащего только PBS и MFnS.
      1. Поместите раствор в магнитный релаксометр. Откройте соответствующее программное обеспечение, выберите настройку «Релаксация T2» и нажмите «Измерить».
      2. После сбора исходного уровня T2 измерьте значения T2 дополнительных растворов, которые были приправлены различными концентрациями бактерий.
        заметка: Изменение T2 эквивалентно исходному уровню T2, вычтённому из скачкового T2.
  5. Извлеките образцы из магнитного релаксометра и центрифугируйте пробирки при давлении 2880 x g в течение 10 минут.
  6. Сцедите надосадочную жидкость и ресуспендируйте бактериальные гранулы в 100 мкл PBS (1X, pH 7,4).
  7. Добавьте 80 мкл каждой ресуспензии в 96-луночный планшет и зарегистрируйте интенсивность флуоресценции при 595 нм.<бр/> заметка: Тестирование можно повторить с использованием различных растворителей, включая озерную воду, молоко и другие, как описано в разделе результатов.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Тетрагидрат хлорида железаНаучный центр ФишераИ90-500
Гексагидрат хлорида железаНаучный центр ФишераИ88-500
Гидроксид аммонияНаучный центр ФишераА669С-500
соляная кислотаНаучный центр ФишераА144С-500
Полиакриловая кислотаСигма-Олдрич323667-100Г
EDCThermofisher ScientificNo 22980
Национальная служба здравоохранения (NHS)Научный центр ФишераAC157270250
Антитела к E. coli O111Сывороточный уход5310-0352 (Английский)
Антитело к E. coli O157:H7 [P3C6АбкамАБ75244
Морилка DiIНаучный центр ФишераД282
Питательный бульонДифкоNo 233000
Сублимированные гранулы E. coli O157:H7АТКС700728
Магнитный релаксометрБрукерМК20
ЗетазерМалвернНАНО-ЗС90
Считыватель пластинТеканБесконечная мышь M200 PRO
Магнитная колонкаКвадроMACSТел.: 130-090-976
центрифугаЭппендорфСерия 5804
Центрифуга (accuSpin Micro 17)Научный центр ФишераТел.: 13-100-676
Напольная модель встряхивающего инкубатораШЕЛ ЛАБИСИ5
аналитические весыМетлер ТоледоМЭ104Е
Цифровой вихревой микшерНаучный центр ФишераТел.: 02-215-370
Шейкер-качалка под открытым небомНаучный центр ФишераТел.: 02-217-765

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

T2

Похожие статьи