Обнаружение бактериального загрязнения с помощью магнитофлуоресцентных наносенсоров

Аннотация

Источник: Шелби, Т., Султана, С., Макафи, Д., Банерджи, Т., Сантра, С. Скрининг патогенов пищевого происхождения с использованием магнитофлуоресцентного наносенсора: быстрое обнаружение E. coli O157:H7. J. Vis. Exp. (2017).

Это видео демонстрирует метод обнаружения бактериальных загрязнителей в образцах пищи и воды с помощью наносенсоров. Целевые патогенные бактерии обнаруживаются с помощью комбинации магнитной релаксации и флуоресцентного излучения.

Протокол

1. Быстрое обнаружение E. coli O157:H7 с помощью MFnS

1. Добавляйте в различные растворы PBS (1X, pH 7,4, 300 μL) увеличивающиеся количества ^10-6 бактериального запаса, в результате чего КОЕ находятся в диапазоне от 1 до 100. Добавляйте в эти растворы постоянное количество MFnS (100 μL).
2. Создайте один исходный раствор, содержащий только PBS (1X, pH 7,4, 300 μL) и MFnS (100 μL).
3. Инкубируйте растворы в течение 30 минут при 37 °C, а затем дайте им остыть до комнатной температуры.
4. Переносите отдельные растворы на магнитный релаксометр (0,47 Тесла) и записывайте изменения времени релаксации (T2) относительно КОЕ в каждом растворе.
   1. Чтобы записать изменения значений T2, начните с измерения значения T2 базового решения, содержащего только PBS и MFnS.
      1. Поместите раствор в магнитный релаксометр. Откройте соответствующее программное обеспечение, выберите настройку «Релаксация T2» и нажмите «Измерить».
      2. После сбора исходного уровня T2 измерьте значения T2 дополнительных растворов, которые были приправлены различными концентрациями бактерий.
         заметка: Изменение T2 эквивалентно исходному уровню T2, вычтённому из скачкового T2.
5. Извлеките образцы из магнитного релаксометра и центрифугируйте пробирки при давлении 2880 x g в течение 10 минут.
6. Сцедите надосадочную жидкость и ресуспендируйте бактериальные гранулы в 100 мкл PBS (1X, pH 7,4).
7. Добавьте 80 мкл каждой ресуспензии в 96-луночный планшет и зарегистрируйте интенсивность флуоресценции при 595 нм.<бр/> заметка: Тестирование можно повторить с использованием различных растворителей, включая озерную воду, молоко и другие, как описано в разделе результатов.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Тетрагидрат хлорида железа	Научный центр Фишера	И90-500
Гексагидрат хлорида железа	Научный центр Фишера	И88-500
Гидроксид аммония	Научный центр Фишера	А669С-500
соляная кислота	Научный центр Фишера	А144С-500
Полиакриловая кислота	Сигма-Олдрич	323667-100Г
EDC	Thermofisher Scientific	No 22980
Национальная служба здравоохранения (NHS)	Научный центр Фишера	AC157270250
Антитела к E. coli O111	Сывороточный уход	5310-0352 (Английский)
Антитело к E. coli O157:H7 [P3C6	Абкам	АБ75244
Морилка DiI	Научный центр Фишера	Д282
Питательный бульон	Дифко	No 233000
Сублимированные гранулы E. coli O157:H7	АТКС	700728
Магнитный релаксометр	Брукер	МК20
Зетазер	Малверн	НАНО-ЗС90
Считыватель пластин	Текан	Бесконечная мышь M200 PRO
Магнитная колонка	КвадроMACS	Тел.: 130-090-976
центрифуга	Эппендорф	Серия 5804
Центрифуга (accuSpin Micro 17)	Научный центр Фишера	Тел.: 13-100-676
Напольная модель встряхивающего инкубатора	ШЕЛ ЛАБ	ИСИ5
аналитические весы	Метлер Толедо	МЭ104Е
Цифровой вихревой микшер	Научный центр Фишера	Тел.: 02-215-370
Шейкер-качалка под открытым небом	Научный центр Фишера	Тел.: 02-217-765