Метод получения моноклональных антител из антиген-специфических В-клеток

Аннотация

Источник: Devilder, M., et al. Генерация дискриминирующих моноклональных антител человека из редких антиген-специфических В-клеток, циркулирующих в крови. J. Vis. Exp. (2018).

Видео демонстрирует технику получения моноклональных антител из антиген-специфических В-клеток. Эукариотические векторы экспрессии, кодирующие тяжелую и легкую цепи антител, клонированные из выделенных антиген-специфических В-клеток, вводят в клетки млекопитающих с помощью полиплексов. Попадая внутрь клеток, эти векторы претерпевают трансляцию, и полученные пептиды тяжелой и легкой цепи собираются в антитела, которые впоследствии секретируются клетками.

Протокол

1. Производство мАТ

1. За день до трансфекции засейте 15 000 клеток человеческого эмбриона почки 293A (HEK 293A) в 200 мкл модифицированной среды Dulbecco Eagle Media (DMEM) с добавлением 10% FBS на лунку в 96-луночных планшетах. Инкубировать в течение ночи в инкубаторе с_СО2 (5%_СО2) при температуре 37 °C.
2. Котрансфект 293А клеток в среде DMEM, содержащей 10% FBS, с использованием линейного производного полиэтиленимина в качестве реагента для трансфекции.
   заметка: Проводят трансфекцию в трех экземплярах. Следующий протокол предназначен для одной лунки 96-луночного планшета с плоским дном. ....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Клеточная линия HEK 293A	Thermo Fisher scientific	Р70507
DMEM (1X) Модифицированный Eagle Medium от Dulbecco	Gibco от life technologies	21969-035	(+) 4,5 г/л D-глюкозы 0,11 г/л пирувата натрия (-) L-глюмин
Нутридома-СП	Рош	11011375001	100X Conc
Фетальная бычья сыворотка (FBS)	Доминик Датчер	С1810-500
Реагент для трансфекции ДНК Jet PEI	ПолиПлюс	101-40
Плоское дно96-луночный планшет	сокол	353072
96-луночный планшет с V-образным дном	Нунк/Термофишер	No 55142

Телефон