Методическая статья

Метод аффинной хроматографии для очистки моноклональных антител

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Elgundi, Z., et al. Лабораторное производство и очистка терапевтического антитела. J. Vis. Exp. (2017).

Это видео демонстрирует метод очистки моноклональных антител из супернатанта культуры, полученного из культуры клеток, продуцирующих антитела. Процесс включает в себя использование матрицы из сшитых агарозных шариков с конъюгированным белком А, который иммобилизует антитела в надосадочной жидкости на гранулах, обеспечивая эффективное отделение от загрязняющих веществ. При применении элюирующего буфера с низким pH взаимодействие белка А-антитела ослабляется, что облегчает сбор фракций, содержащих антитела.

Протокол

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Очистка антител с помощью аффинной хроматографии с использованием автоматизированной системы быстрой белковой жидкостной хроматографии (FPLC)

ПРИМЕЧАНИЕ: Следующая процедура в общем случае может быть применена к большинству автоматизированных систем. Очистка может производиться при комнатной температуре или при 4 °C (если система FPLC хранится в прохладном помещении). Для определения оптимальных условий очистки, включая соответствующую матрицу колонок, связывающий буфер, буфер для элюирования и рН, можно провести серию скаутских тестов для обеспечения максимального восстановления очищенных антител из конди....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Фосфатно-солевой буфер (PBS) таблетки, pH 7,4, 100 млТел.: 09-2051-100Астральный научный
HiTrap Protein A High Performance, 1 x 5 мл колонкаГЭ17-0403-01Сигма-Олдрич
Очиститель AKTApurifier 10028406266GE HealthcareАвтоматизированная система FPLC, которая может включать в себя насос для отбора проб P-960 и сборник фракций Frac-920.
Глицин-гидрохлоридГ2879Сигма-Олдрич
Лимонная кислота, моногидратBIOC2123Астральный научный
Цитрат натрия, дигидрат тринатриевой солиBIOCB0035Астральный научный
1 М раствор Tris-HCl pH 9,0BIOSD8146Астральный научный
Центробежные фильтры Amicon Ultra (30 MWCO)UFC803008/UFC903008Мерк МиллипорИспользуется для буферного обмена и концентрации очищенного белка.
Набор для анализа бицинхониновой кислоты (BCA) ПирсаNo 23227Thermo Fisher Scientific
Система BLItz45-5000fortéBIOПрибор, используемый для измерений биослойной интерферометрии (BLI).
Биосенсоры белка А18-5010fortéBIO

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

AFPLC

Похожие статьи