Иммунофлуоресцентный анализ для выявления агрегатов альфа-синуклеина в биопсийном срезе кожи

Аннотация

Источник: Vacchi, E., et al. Нацеливание на агрегаты альфа-синуклеина в кожных периферических нервных волокнах с помощью свободно плавающего иммунофлуоресцентного анализа. J. Vis. Exp. (2019).

Это видео демонстрирует иммунофлуоресцентный анализ для обнаружения агрегатов альфа-синуклеина, специфичных для нейродегенеративных заболеваний, на срезах биопсии кожи. Свободно плавающее иммуноокрашивание используется для флуоресцентного мечения карбоксил-концевой гидролазы и агрегатов альфа-синуклеина в дермальных нейронах. Под конфокальным микроскопом клетки с флуоресценцией обоих антител указывают на наличие агрегатов альфа-синуклеина в дермальных нейронах.

Протокол

Все процедуры, связанные со сбором образцов, были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB,

1. Забор биопсии кожи

1. Квалифицированный врач проведет биопсию кожи в соответствующих клинических условиях.
2. Выберите зону для проведения биопсии кожи и очистите ее спиртовым тампоном.
3. Приготовьте обезболивающий раствор с 1 мл лидокаина 2%.
4. С помощью иглы параллельно этой области введите местную анестезию подкожно.
5. После проверки эффекта анестезии возьмите одноразовый перфоратор диаметром 3 мм и надавите вращательным и деликатным нисходящим давлением, вращая его вниз че....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
5G4 (античеловеческий αSyneclein 5G4)	Analytik Jena Roboscreen	847-0102004001	Мышь моноклональная
AlexaFluor 488 Козий антикролик IgG	Инвитроген	1971418	2 мг/мл
AlexaFluor 594 Козий антимышиный IgG	Инвитроген	1922849	2 мг/мл
Раствор гидрофосфата натрия	Мерк Миллипор	106586
Этиленгликоль	Сигма-Олдрич	324558
глицерин	Сигма-Олдрич	Г7757
L-лизин моногидрохлорид	Сигма-Олдрич	Л5626
Параформальдегид	Олдрич Химия	441244
ПГП9.5	Абкам	АБ15503	Кролик поликлональный
Хлорид натрия	сигма	С3014
Натрия дигидрофосфата моногидрат	Мерк Миллипор	106346
Натрия (мета)периодат	Сигма-Олдрич	С1878
База Тризма	сигма	Т1503
Тритон Х-100	Сигма-Олдрич	Х100
Вектащит	Лаборатория «Вектор	Н-1000	Монтажный материал

»