Method Article

Пептидная микрочиповая технология для профилирования специфичности антител

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Корнетт, Э. М., и др. Анализ специфичности антител к гистонам с помощью пептидных микрочипов. J. Vis. Exp. (2017).

Это видео демонстрирует метод, который применяет технологию пептидных микрочипов для профилирования специфичности антител, распознающих посттрансляционные модификации (PTM) на гистоновых пептидах. Предметное стекло микрочипа, содержащее иммобилизованные фторофор-конъюгированные гистоновые пептиды с известными комбинациями ПТМ, обрабатывают мишенью ПТМ-специфическими антителами. Этот процесс помогает определить специфичность антитела для мишени и его потенциальную перекрестную реактивность с нецелевыми ПТМ.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Проектирование слайда массива и компоновки исходной пластины

  1. Под заголовком «Планирование макета слайдов» в интерфейсе ArrayNinja нажмите на ссылку, соответствующую используемому принтеру микрочипов.
    заметка: ArrayNinja был запрограммирован на имитацию роботизированных движений двух широко используемых микрочиповых принтеров (см. Таблицу 1). Совместимость с другими массивами может быть сконфигурирована по запросу.
  2. Нажмите в диалоговом окне "Загрузить пластину", введите "empty" и нажмите "enter". На рисунке 1 показан скриншот модуля проектирования ArrayNinja.
  3. Отр....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Рисунок 1: Модуль проектирования ArrayNinja. Скриншот модуля дизайна ArrayNinja показан пунктирной линией. На панели управления (вверху) отображаются все параметры, которые можно изменить на принтере с микрочипами. По мере корректировки этих параметров мультяшное изображение макета слайда (внизу слева) обновляется в режиме реального времени. После того, как макет настроен, пользователь может наводить.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Буфер для печатиArrayIt (ArrayIt)ППБ
БСАОмнипюр2390
Предметные стекла для микроскопа со стрептавидиновым покрытиемGreiner Bio-one439003-25
полипропиленовая пластина 384 лункиGreiner Bio-one784201
Биотин-флуоресцеинсигма53608
Контактный микрочиповый принтерОшон2470Микрочиповый принтер Aushon 2470
Контактный микрочиповый принтерГенные машиныОмниГрид 100Микрочиповый принтер OmniGrid
ПБСИнвитроген14190
Блокирующий буферArrayIt (ArrayIt)СББ
Гидрофобная восковая ручкаВекторные лабораторииН-4000ImmEdge Гидрофобный барьер PAP Pen
Силиконовая прокладкаБио-лаборатории Грейс622511
Гибридизационный сосудТермо Сайентиал267061или аналогичное судно
Вторичное антитело, сопряженное с флуоресцентным красителемТехнологии LifeА-21244Alexa Fluor 647 (против кроликов)
Вторичное антитело, сопряженное с флуоресцентным красителемТехнологии LifeА-21235Alexa Fluor 647 (антимышь)
Восковой импринтерArrayIt (ArrayIt)МСИ48
Подросток-20Омнипюр9490
Микрочиповый сканерИннопсисИнноСкан 1100ALили эквивалентный микрочиповый сканер
Микрочип гистонового пептида EipTitanЭпишифр112001
Микрочип AbSurance Pro с гистоновым пептидомМногородность16668
Модифицированная матрица гистоновых пептидовАктивный мотив13001
Микрочипы с гистон-кодом пептидными микрочипамиJPTHis_MA_01
воскРойял ОукГульфВоскдля воскового импринтера
Камера для гибридизации слайдов с увлажненным микрочипомВВР97000-284
Высокопроизводительная камера для промывки предметного стекла для микроскопаArrayIt (ArrayIt)HTW
Слайдовая центрифуга для микроскопаВВР93000-204
Антитело 1Абкам8898
Антитело 2Многородность07-473 (Английский
Биотинилированный гистоновый пептидЭпиШифр12-2001Пример пептида. Подобные пептиды с различными модификациями выпускаются из нескольких коммерческих источников.
ИмиджМагикаhttps://www.imagemagick.org/script/index.php
МассивНиндзяhttps://rothbartlab.vai.org/tools/
г. г. г. )

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Peptide MicroarrayAntibody SpecificityHistone PeptidesPost Translational ModificationsFluorescence DetectionMicroarray ScannerHybridization BufferSecondary AntibodiesBlocking BufferWax Imprinter

Related Articles