$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные со сбором образцов, были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.
1. Основная информация об учебной группе
ПРИМЕЧАНИЕ: Репозиторий информации об аллергии Государственной ключевой лаборатории респираторных заболеваний (AIR-SKLRD) - это большой банк сыворотки, созданный внутри Института респираторной больницы Гуанчжоу (GIRH). Созданная в последнее десятилетие система AIR-SKLRD уже начала собирать и хранить образцы сыворотки крови пациентов с аллергическими заболеваниями и их клиническую информацию (Таблица 1). Данное исследование проводилось с использованием сывороток от AIR-SKLRD.
- Выполните поиск сывороток в базе данных AIR-SKLRD за период с января 2015 г. по июнь 2018 г. и выберите пациентов с аллергическими заболеваниями, которые были признаны чувствительными к распространенным аллергенам в регионе.
- Убедитесь, что все отобранные пациенты имеют аллергические заболевания, такие как аллергический ринит и/или астма, аллергический дерматит и/или крапивница, и что сыворотка крови этих пациентов содержит множественные сывороточные аллерген-специфические иммуноглобулины Е (sIgE) сенсибилизации распространенных аллергенов в этой области, обнаруженных Системой 1.
- Исключите пациентов с неполной медицинской картой, тех, кто был потерян для последующего наблюдения, тех, кто отказывается дать информированное согласие на использование их образцов сыворотки в научных целях, пациентов с выявленным иммунодефицитом, тех, кто в настоящее время получает иммунотерапию или иммуномодулирующие препараты, или тех, у кого обнаружены паразитарные инфекции.
- Убедитесь, что перед сбором сыворотки не назначалось лечение или лекарственные препараты, чтобы свести к минимуму вмешательство в результаты лабораторных исследований. Все образцы сыворотки, которые не соответствовали критериям, были отбракованы.
2. Изучение потока и интересующих измерений
ПРИМЕЧАНИЕ: Микрофлюидной системе требуется 100 μL сыворотки для определения 19 аллергенов. У каждого пациента собирали венозную кровь (5 мл) с помощью вакуумного кровеносного сосуда, содержащего разделительный гель. После центрифугирования в течение 10 мин при 1000 x g верхний слой собирали для тестирования. Неиспользованную сыворотку хранили при температуре -80 °С. Перед тестированием сыворотку выдерживали при комнатной температуре в течение 30 минут и встряхивали вихревым миксером. Удалось избежать повторных циклов замораживания и оттаивания.
- В первую очередь исследуйте образцы сыворотки на sIgEs на целые аллергены Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), кошачью перхоть (e1), собачью перхоть (e5), бермудскую траву (g2), тимофеевку (g6), тараканов (i6), Aspergillus fumigatus (m3), Candida albicans(M5), Амброзия (W1), Яичный белок (F1), Молоко (F2), Пшеница (F4), Арахис (F13), Соевые бобы (F14), Миндаль (F20), Краб (F23) и Креветки (F24). Следуйте инструкциям, приведенным в разделе 3.
Примечание: определение sIgE проводили с помощью набора для анализа IgE, специфичного для аллергенов (см. Таблицу материалов) и измеряли с помощью хемилюминесцентного анализатора.
- Случайным образом выберите три образца из образцов с достаточным количеством сыворотки (не менее 900 мкл) для исследования воспроизводимости. Сохраняя все условия без изменений, измеряйте три сыворотки на аллерген sIgEs ежедневно в течение 9 дней подряд (т.е. 100 x 9 = 900 μл сыворотки).
3. Процедура полуавтоматического испытания микрофлюидной системы
ПРИМЕЧАНИЕ: Система 2 объединяет автоматическую микрофлюидную технологию, белковые микрочипы, анализ холодного света, параллельный анализ IgE и технологию обработки изображений. Протокол тестирования разделен на четыре части: подготовка оборудования, загрузка образца, инкубация и измерение.
- Подготовка оборудования
- Включите компьютер и анализатор power.
заметка: Выключатель питания находится слева от основания.
- Запустите программу LabIT на ПК. Если появится окно с предупреждением о темной раме, нажмите OK, чтобы запустить тест на утечку. После этого нажмите на центральный логотип, чтобы войти в интерфейс управления.
заметка: Система напомнит пользователю о необходимости запустить тест на утечку, если он простаивает более 24 часов.
- Проверьте температуру реакции и температуру ПЗС-матрицы (устройства с зарядовой связью) в правом нижнем углу экрана. Температура реакции должна повыситься до 37 °C ± 1 °C примерно за 10 минут, а температура CCD должна упасть до -15 °C ± 1 °C.
- Проведите тест на герметичность после того, как температура ПЗС-матрицы снизится до -15 °C ± 1 °C. Перед проведением теста на герметичность убедитесь, что внутри прибора не осталось других предметов, и закройте дверцу. Нажмите Инструменты | Тест системы | Тест на утечку. Не открывайте дверцу во время тестирования. Когда тест будет завершен, появится всплывающее окно отчета.
- Загрузка образцов
- Добавьте 620 мкл промывочного буфера, 120 мкл блокирующего буфера, 60 мкл конъюгатов А и В, 60 мкл субстрата А и В и 100 мкл образцов сыворотки в соответствующий резервуар с реагентами на микрофлюидном картридже.
- инкубация
- Нажмите на Cartridge ID, используйте сканер штрих-кодов для сканирования серийного номера картриджа, введите идентификатор образца, вставьте картридж в анализатор, закройте дверцу и нажмите Analyzer and Run, чтобы начать анализ.
- измерение
- Экспортируйте результаты в статистическое программное обеспечение (например, Excel) после измерения.
ПРИМЕЧАНИЕ: После 30 минут инкубации анализатор автоматически выполняет измерение и сообщает о результате.
Таблица 1: Демографические характеристики пациентов. Всего было найдено 293 субъекта, которые соответствовали критериям включения, с медианой возраста 23 года (межквартильный диапазон от 8 до 36 лет). Среди них 170 (58,02%) мужчин и 123 (41,98%) женщин. Кроме того, 92 (31,40%) из них имели аллергический ринит, 117 (39,93%) — аллергическую астму, 36 (12,29%) — коморбидность ринита и астмы, а 48 (16,38%) — другие аллергические заболевания, такие как пищевая аллергия или кожная аллергия.
| характерный | No.( %) |
| Пол, n(%) | |
| женский | 123(41.98%) |
| мужской | 170(58.02%) |
| Возраст, год, n(%) | |
| Медиана (25%,75%) | 23(8,36) |
| ≤10 | 97(33.11%) |
| 11-20 | 37(12.63%) |
| 21-40 | 101(34.47%) |
| >41 | 58(19.80%) |
| Диагноз, n(%) | |
| Аллергический ринит | 92(31.40%) |
| Аллергическая астма | 117(39.93%) |
| Аллергический ринит с астмой | 36(12.29%) |
| Другие | 48(16.38%) |