| Абсолютный этанол | Лабхим | ЛБ0507-9010 | неразбавленный |
| | | | Разведенные на 90%, 70% и 50% в дистиллированной воде |
Авидин-биотиновый комплекс и пероксидаза
Пероксидаза Vectastain Elite ABC kit | Лаборатория «Вектор | ПК-6100 | Приготовьте и аккуратно перемешайте за 30 минут до использования в соответствии с инструкциями набора. Не перемешивайте после стояния. |
| Биотинилированное вторичное антитело (Horse anti-mouse IgG H+L) | Лаборатория «Вектор | БА-2000-1,5 | Разведите в дозе 1/200 в TBS с 10% лошадиной нормальной сывороткой. Подготавливайте необходимый объем в зависимости от количества секций. |
| Хромоген диаминобензидин-DAB, набор субстратов, пероксидаза | Лаборатория «Вектор | СК-4100 | Подготовьте перед использованием в соответствии с инструкциями по набору.
Используйте 400 μл раствора на секцию. |
| Барокамера DakoCytomation Pascal | ДАКО | С2800 | |
| Гематоксилин Эрлиха: | | | |
| Абсолютный этанол | Лабхим | ЛБ0507-9010 | |
| Ледяная уксусная кислота | Мерк | 101830 Номер 101830 | |
| Квасцы калия | Мерк | 1.01047.1000 | |
| глицерин | Мерк | 1.04091.1000 | |
| Раствор эндогенной пероксидазы Блок (3% концентрацияН2О2): | | | 40 мл перекиси водорода (30% по массе) в 360 мл метанола.
Подготовьте перед использованием |
| Перекись водорода (30% по массе) | Шарлау | ХИ0136 | |
| метанол | Сигма Олдрич | 322415-2Л | |
| Муравьиная кислота 98% | Мерк | 1.00264.1000 | неразбавленный |
| микротом | Шаньдон-AS325 | микротом | Шаньдон-AS325 |
Нормальный сывороточный (20% ) блочный раствор в TBS:
Нормальная сыворотка для лошадей | Gibco | 16050-122 | Подготовьте окончательный объем в соответствии с количеством срезов в анализе
(200 мкл раствора на секцию). |
| Первичное антитело против PrP мыши MAb 2G11 | БИОРАД | MCA2460 | ПрП 146-R154R171182<бр/>
Овцы, в том числе нетипичные скрейпи, цервины, кошачьи. Не подходит для крупного рогатого скота.
В зависимости от количества срезов в анализе (200 мкл раствора на срез) и разведения антител получают конечный объем в TBS с добавлением 10% нормальной сыворотки из видов, в которых было поднято вторичное антитело (нормальная сыворотка лошади)
Обычное разведение антител: MAb 2G11 1/100, но рабочее разведение должно быть установлено в каждой новой партии, чтобы получить концентрацию, дающую самую сильную мечение с наименьшим фоном. Для хранения заморозьте аликвоты объемом не менее 10 мкл в стерильных микропробирках. Разморозьте и используйте по одной аликвоте за раз. |
| Первичное антитело против PrP мыши MAb 12F10 | Каймановы химические компании | 189710 | ПрП142-160<бр />
Говядина, не подходит для овцы<бр />
Обычное разведение антител: 1/200, но также должно быть установлено рабочее разведение. Подготовка как MAb 2G11 |
| Камера Shandon CoverplateTM | Термо Сайентиал | 72110017 | |
| Шандон Секвенза® Иммунстейнинг центр | Термо Сайентиал | 73300001 | |
| Shandon Sequenza® Immunstaining решетка для слайдов | Термо Сайентиал | 73310017 | |
| Раствор цитратного буфера (10 мМ pH 6,1): | | | 2,55 г дигидрата цитрата натрия и 0,255 г лимонной кислоты в одном литре очищенной воды.
Отрегулируйте рН рабочего раствора до 6,1 с помощью 10 мМ раствора лимонной кислоты (1,05 г лимонной кислоты в 500 мл очищенной воды)<бр/>
Приготовьте в день пробы. |
| Дигидрат цитрата натрия дигидрат | Сигма-Олдрич | С4641-500Г | |
| лимонная кислота | Сигма Олдрич | С0759 | |
| Окрашивание баночки и корзины | Дельталаб | 19360 | |
| | 19361 | |
| Предметные стекла для микроскопа Superfrost Plus | ВВР | 631-0108 | |
| Трис-буферизованный физиологический раствор (TBS) (50 мМ основание ТРИЗМА; 0,8% NaCI; pH 7,6): | | | 10xTBS (стоковый раствор 0,5 м основания ТРИЗМЫ; 8% NaCI; pH 7,6):
БАЗА ТРИЗМА 60,57 г и NaCl 80 г в 800 мл очищенной воды. Отрегулируйте pH исходного раствора с помощью соляной кислоты 37% и конечный объем до одного литра с очищенной водой (держите 5± 3 °C до 2 месяцев)<бр/>
Разведите стоковый раствор TBS на 1/10 в день анализа. |
| БАЗА ТРИЗМА | Сигма Олдрич | Т6066-1КГ | |
| Хлорид натрия (NaCl) | Мерк | 106404 | |
| ксилол | Реагенты Panreac Applied Chem ITW | 251769 | неразбавленный |