Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Оценка индуцированного Т-клеточными рецепторами притока кальция с помощью красителя-индикатора кальция

982 просмотров

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Perrenoud, L. et al., Анализ индуцированного рецепторами Т-клеток притока кальция в первичных Т-клетках мыши с помощью проточной цитометрии полного спектра.J. Vis. Exp. (2022)

В этом видео анализируется индуцированный рецепторами Т-клеток приток кальция в Т-клетки. Антитела к CD3 активируют сигнальные пути Т-клеток, что приводит к увеличению внутриклеточных ионов кальция, которые связываются с красителем Indo-1. В проточной цитометрии сдвиг спектра от свободного от кальция состояния к кальций-связанному коррелирует с индуцированным Т-клеточными рецепторами притоком кальция.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Получение иммунных клеток из селезенки мыши

ПРИМЕЧАНИЕ: Усыпляйте наивных мышей с помощью эвтаназии углекислым газом (CO2). Мыши C57BL/6, приобретенные в Jackson Laboratories и выращенные на заводе, используются для экспериментов в возрасте 6-12 недель. Для экспериментов используются как самцы, так и самки мышей.

  1. Продезинфицируйте кожу мыши 70% этанолом, чтобы снизить возможность попадания внешних загр....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
12-луночные пластины, обработанные ТСКлеточное лечение229111
50 мл коническийГрайнер Био141-12-17-03Полипропиленовые центрифужные пробирки 50 мл с крышкой
Проточные трубки из полистерола 5 млКорнинг352052
Шприц объемом 5 млШприц BD309646Используется только плунжер, но его выбрасывают
Фильтр 70 мкМГрайнер биография1542070 (Английский
аCD3 (17А2)Биолегенда100202
Буфер для лизиса AKCGibcoA1049201
Спектральный проточноцитометр Aurorahttps://cytekbio.com/pages/aurora
Бусы для ванныКолепармерТовар # UX-06274-52
CD19 ПЭТонбо50-0193-У100
CD1d Tetramer APCНИЗ
КД25 ПЭКи7ebioscience15-0251 (Английский
CD4 APC Cy7Тонбо25-0042-У100
CD8a FITCebioscienceТел.: 11-0081-85
Клеточный инкубаторФормально-научная
Инструменты для рассечения щипцамиМаккессон#487593Тканевые щипцы McKesson Adson 4-3/4 дюйма длиной офис нержавеющая сталь нестерильная неблокирующая ручка для большого пальца 1 x 2 зуба
Инструменты для препарирования НожницыМаккессон#970135Операционные ножницы McKesson Argent™ 4-1/2 дюйма хирургического класса нержавеющая сталь для пальца кольцо ручка прямой острый кончик / острый кончик
DPBS 1xGibco14190-136ДПБС
ЭГТАрыбакNC1280093
ФБСГикрондSH30071.03лот AE29165301
Программное обеспечение FlowJohttps://www.flowjo.com/
Indo1-AM Эфирный красительebioscienceТел.: 65-085-39Кальциевый загружающий краситель
ИономицинМногородность407951-1мг
Живой/Мертвый призрак 540Тонбо13-0879-Т100
Микроцентрифужные пробирки 1,7 млСветовые лабораторииА-7001
Пенициллин/стрептомицин/L-глютаминGibco10378-016
ПРН694Мед Хим ЭкспрессХай-12688
Очищенный антимышиный CD16/CD32 (FC Shield) (2.4G2)Тонбо70-0161-М001Блок ФК
РПМИGibco1875093 + фенол красный
RPMI без фенолаGibco11835030 -фенол красный
Настольная центрифугаБекман КоултерАллегра612
TCRβ PerCP Cy5.5ebioscience45-5961-82
TCRγ/δ Pe Cy5ebioscienceТел.: 15-5961-82
Набор реагентов Vi-Cell BluКод товара: C06019Включает Трипан
Vi-Cell BluБекман Коултер
Водяная баняСухая ванна марки Fisher
) ) гг.

Теги

Indo 1CD3FcIndo 1Indo 1