Method Article

Метод мультиплексного иммуноокрашивания с использованием первичных антител от одного и того же вида хозяина

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Lyu, Q., et al. микроразогревание и фторофор-тирамид для мультиплексного иммуноокрашивания надпочечников мышей − с использованием неконъюгированных первичных антител от того же вида хозяина. J. Vis. Exp. (2020).

Это видео демонстрирует анализ для выполнения мультиплексного иммуноокрашивания с использованием первичных антител от того же вида хозяина. При этом методе участок ткани надпочечника подвергается двухэтапному процессу иммуноокрашивания. Первоначально срез окрашивают антителами, специфичными к маркерам в коре головного мозга, после чего удаляют связанное антитело и сохраняют антителами, специфичными к маркерам в мозговом веществе.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные со сбором образцов, были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.

1. Окрашивание первым антителом

  1. Депарафин и регидрат с фиксированным формалином парафином (FFPE) по 5 минут отводится на каждый из следующих этапов: ксилол или эквивалентные реагенты 3x, 100% этанол 2x, 95% этанол 1x, 70% этанол 1x, 50% этанол 1x и дистиллированная вода 2x.
    заметка: Предметные стекла должны оставаться влажными, начиная с этого этапа регидратации до монтажа на последнем этапе.
  2. Для факультативного извлечения антигена поместите предметные стекла в 275 мл кипящ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Защитная от выцветания монтажная средаЛаборатория «ВекторН-1000
Биотинилированный антимышь для осликовДжексонИммуно715-066-151 (Английский)Разведение 1:500
Биотинилированный ослик против кроликаДжексонИммуно711-066-152Разведение 1:500
DAPIБиолегенда4228012 мкг/мл в дистиллированной воде
Флуоресцентный микроскопэхоВращение 4
Стрептавидин, пероксидаза-конъюгированный с хреномДжексонИммуно016-030-084 (АнглийскийРазведение 1:1000
Микроволновая печь, 700 ВтДженерал ЭлектрикJEM3072DH1BB
Мышь анти-CYP2F2Санта-Крус,СК-374540Разведение 1:250
Мышь анти-THСанта-Крус,СК-25269Разведение 1:1000
Обычная ослиная сывороткаДжексонИммуно017-000-121 (Английский2% сыворотка в PBST
Кролик анти-20αHSDКерафаст,ЕВ4002Разведение 1:500
Кролик анти-3βHSDТрансгенный,КО607Разведение 1:250
Кролик анти-ТГНОВУС,НБ300-109Разведение 1:1000
Кролик анти-β-катенинАбкам,АБ32572Разведение 1:500
Стрептавидинпероксидаза хрена (SA-HRP)ДжексонИммуно016-303-084 (АнглийскийРазведение 1:1000
TSA Cy3 ТирамидПеркинЭлмерSAT704B001EAРазведение 1:100
TSA Флуоресцеин ТирамидПеркинЭлмерSAT701001EAРазведение 1:100
» ) ) )

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Multiplex ImmunostainingPrimary AntibodiesFluorophore TyramideAntibody StrippingAdrenal TissueCortex MedullaMicrowave Antigen RetrievalStreptavidin PeroxidaseNuclear StainingFluorescence Microscopy

Related Articles