Измерение фагоцитарной эффективности макрофагов с помощью примахина и фотодинамической терапии

Аннотация

Видео демонстрирует оценку влияния фотодинамического лечения на фагоцитарную эффективность мышиных макрофагов с помощью примахина. Обработанные, инфицированные макрофаги генерируют активные формы кислорода, что приводит к селективной гибели грибков, о чем свидетельствует уменьшение колоний на пластине.

Протокол

1. Получение криптококковых клеток

1. Нанесите тестируемый организм с помощью петли инокуляции на стерильную агаровую пластину из дрожжевого солодового экстракта (YM).
2. Инкубируйте агаровую пластину при температуре 30°C в течение 48 часов.
3. С помощью петли инокуляции зачерпните 5 одиночных колоний и суспензируйте их в 5 мл стерильной дистиллированной воды.
4. Стандартизируйте клетки с использованием стандарта Макфарланда для получения концентрации клеток от 0,5 × 10⁵ до 2,5 × 10⁵ колониеобразующих единиц (КОЕ) на мл среды RPMI-1640.
5. Диспонируйте клеточную суспензию объемом 100....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
агар	Мерк		Используется для подготовки пластин YM
Дрожжевой экстракт	Мерк		Используется для подготовки пластин YM
Солодовый экстракт	Мерк		Используется для подготовки пластин YM
пептон	Мерк		Используется для подготовки пластин YM
глюкоза	Мерк		Используется для подготовки пластин YM
Трипановая синева морилка	Сигма-Олдрич		Перечисление живых и мертвых клеток
Стандарт Макфарланда	Научный центр Фишера		Для стандартизации ячеек
Примахин	Мерк		Используется в качестве фотосенсибилизатора
Фосфатный буферный раствор (PBS)	Сигма-Олдрич		Промывка и разбавление ячеек
РПМИ-1640 средний	Биохром		Питательные среды для макрофагов
Фетальная бычья сыворотка (FBS)	Биохром		Используется в качестве дополнения к среднему РПМИ-1640
Пенициллин/стрептомицин/L-глутамин	Сигма-Олдрич		Добавлено в средний RPMI-1640
0,1% Тритон Х-100	Сигма-Олдрич		Используется для лизиса макрофагов
96-луночный планшет для микротитрования с плоским дном	Greiner Bio-One		Используется в качестве сосуда, внутри которого происходили реакции
Тканевая колба	Ласек		Используется для культивирования макрофагов
Центрифужная пробирка объемом 50 мл	Ласек		Используется для содержания макрофагов
Скребок ячеек	Ласек		Используется для отделения макрофагов от тканевой колбы
Петля инокуляции	Ласек		Используется для нанесения культуры на агаровую пластину
Гемоцитометр	Мариенфилд		Для определения клеточной концентрации макрофагов
Пластиковые пробирки объемом 1,5 мл	Мерк		Используется в качестве сосуда, внутри которого происходили реакции
УВЛ	ЭСКО		Используется для активации фотосенсибилизатора
CO2-инкубатор	ТермоФишер		Используется для инкубации макрофагов
Шкаф биологической безопасности класса II	ЭСКО		Чтобы безопасно работать с возбудителями, не причиняя вреда пользователю.