Method Article

Подавление репликации вируса гепатита В с помощью вирусных антиген-специфических Т-клеток

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Xiong, X., et al. Вирусные Ag-специфические Т-лимфоциты, полученные из стволовых клеток, подавляют репликацию HBV у мышей. J. Vis. Exp. (2019).

Видео демонстрирует анализ с использованием CD8+ Т-клеток, полученных из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека (iPSC), для ингибирования репликации вируса гепатита B (HBV) у мышей. Эти Т-клетки, сконструированные с помощью HBV-специфических рецепторов, переносятся в трансгенных мышей. Репликационно-компетентные плазмиды генома HBV затем вводятся непосредственно в печень, обеспечивая поглощение вирусной ДНК. После того, как вирусные антигены экспрессируются и представлены гибридными молекулами MHC-I, сконструированные Т-клетки распознают эти комплексы и связываются с ними. Это вызывает высвобождение цитотоксических молекул, что приводит к разрушению инфицированных HBV клеток печени и подавлению репликации вируса.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные с животными моделями, были проверены local
институциональный комитет по уходу за животными и ветеринарный наблюдательный совет JoVE. Все процедуры по сбору проб были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.

1. Генерация вирусных Ag-специфичных CD8+ Т-клеток из iPSCs (iPSC-CD8+ T-клеток)

  1. Создание ретровирусных конструкций
    заметка: Гены α и β Т-клеточного рецептора (TCR) связаны с последовательностью саморасщепления 2A. Ретровирусным вектором MSCV-IRES-DsRed (MiDR) является DsRed+.
    1. Субклонирование специфичных к....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Рисунок 1: Генерация вирусных Ag-специфических iPSC-CD8+ Т-клеток вируса HBV.

Мышиные иПСК трансдуцируются следующими ретровирусными конструкциями: HBs183-91 TCR (MiDR-s183 TCR) или OVA257-264 TCR (MiDR-OVA TCR), а трансдуцированные иПСК совместно культивируются со стромальными клетками OP9-DL1/DL4 для дифференцировки Т-линии. (A) Схематическое изображение ретро.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Мыши HHDИнститут Пастера, Париж, ФранцияH-2 класса I с нокаутом, HLA-A2.1-трансгенные (HHD) мыши
iPS-MEF-Ng-20D-17Банк клеток RIKENAPS0001
СНЛ76/7АТКСПКРК-1049
ОП9АТКСЦРЛ-2749
Плазмида pAAV/HBV1.2Д-р Пей-Джер Чен (Национальная университетская больница Тайваня, Тайвань)Конструкция ДНК HBV
HBs183-91(s183) (FLLTRILTI)-специфичные гены TCRД-р Адам Геринг (Научно-исследовательский институт больницы общего профиля Торонто, Торонто, Канада)FLLTRILTI-специфичные A2-ограниченные гибридные гены человека и мыши TCR (Vα34 и Vβ28)
OVA257–264-специфичные гены TCRД-р Дарио А. Виньяли (Университет Питтсбурга, Пенсильвания)SIINFEKL-специфичные H-2Kb-ограниченные TCR гены
Антитела к CD3 (17A2)Биолегенда100236
Антитела к CD44 (IM7)BD Pharmingen103012
Антитела к CD4 (GK1.5)Биолегенда100408
Антитела к CD8 (53-6.7)Биолегенда100732
Антитела к ИФН-γ (XMG1.2)БиолегендаNo 505810
Антитела к TNF-a (MP6-XT22)Биолегенда506306
α-MEMИнвитрогенА10490-01
Антитела к HBsТермо ФишерМА5-13059
Буфер для лизиса ACKЛонза10-548Э
Брефельдин АсигмаВ7651
DMEMИнвитрогенABCD1234
ФБСГиклонШ3007.01
Сортировщик ячеек FACSAria FusionБДНомер 656700
желатинМиллипорСигмаГ9391
Генератор GeneJammerAgilentNo 204130
Пентамер HLA-A201-HBs183-91-PEПроиммунныйФ027-4А - 27
HRP Вторичное антитело против мышиИнвитрогенА27025
mFlt-3LПепротех250-31л
мИл-7Пепротех217-17
Нуклеаза S7Рош10107921001
ПараформальдегидМиллипорСигмаП6148-500ГВнимание: Аллергенный, канцерогенный, токсичный
Пермеабилизационный буферБиолегенда421002
ПолибренМиллипорСигма107689
Крепление ProLong™ Gold Antifade с DAPIИнвитрогенП36931
QIAamp MinElute Virus Spin KitЦягэнNo 57704

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Hepatitis B VirusViral Antigen Specific T CellsiPSC Derived CD8 T CellsHydrodynamic Plasmid DeliveryHBV Genome PlasmidsTail Vein InjectionAntigen Presenting MoleculesCytotoxic Molecule ReleaseHBV Infected Liver CellsViral Replication Suppression

Related Articles