Очистка самоорганизующихся белковых наночастиц с помощью аффинной хроматографии

Abstract

Источник: Karch, C. P. et al., Производство самоорганизующихся белковых наночастиц, экспрессируемых E. coli, для вакцин, требующих тримерной презентации эпитопов.J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует очистку самоорганизующихся белковых наночастиц или SAPN, помеченных гистидином, с помощью аффинной жидкостной хроматографии. Полученные очищенные фракции SAPN пригодны для разработки вакцин и имеют перспективы для потенциального иммунотерапевтического применения.

Protocol

1. Экспрессия ядра самоорганизующихся белковых наночастиц, содержащего белок из шести спиралей (SHB-SAPN) в E. coli BL21(DE3)

1. Смешайте 95 мл компонента А и 5 мл компонента Б среды в колбе Эрленмейера из стерильного стекла объемом 2 л в соответствии с инструкцией производителя (см. Таблицу материалов). Добавьте ампициллин до конечной концентрации 100 мкг/мл.
2. Инокулируйте среду кишечной палочкой из ранее созданной глицериновой исходной культуры. Инкубировать культуру при 30 °C с встряхиванием со скоростью 200 оборотов в минуту (об/мин) в течение 48 ч.<бр/> ПРИМЕЧАНИЕ: Использова....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
2-пропанол	рыбак	BP26181	4 л
Ампициллин	рыбак	БП1760-25	25 г
Corning Одноразовые вакуумные фильтры/системы хранения	рыбак	Тел.: 09-761-108	Разнообразие размеров
GE Healthcare 5 мл HisTrap HP Расфасованные колонны	GE HealthCare	Тел.: 45-000-325	5 упаковка
глицерин	рыбак	БП229-4	4 л
Имидазол	рыбак	О3196-500	500 г
Волшебная среда для экспрессии E. coli	ТермоФишер	К6803	1 л
Стерильный шприц MilliporeSigma Millex 0,22 мм Фильтры	Многородность	SLGV033RB	Упаковка 250
One Shot BL21 Star (DE3) Химически компетентная кишечная палочка	ТермоФишер	C601003	20 флаконов
Натрия фосфат одноосновной	рыбак	БП329-500	500 г
База Трис	рыбак	БП152-1	1 кг
мочевина	рыбак	БП169-500	2,5 кг
оборудование
Fiberlite F14-14 x 50cy Ротор с фиксированным углом наклона	ТермоФишер	096-145075 (Английский	ротор
Хроматографическая система NGC Quest 10	БиоРад	7880001	FPLC для очистки белка
Сонифер 450	Брэнсон	также известен как 096-145075	Ультразвуковой аппарат