Анализ in vitro для скрининга интерферонов как мощных ингибиторов роста вируса Зика

Аннотация

Источник: Contreras, D. et al., Система культивирования инфицированных клеток вируса Зика и профилактический эффект интерферонов in vitro. J. vis. Exp. (2016)

Видео демонстрирует анализ in vitro для скрининга интерферонов с противовирусной активностью против вируса Зика, патогена человека. Внутри клетки-хозяина вирус Зика размножается при интернализации, заражая соседние клетки и создавая отдельные зоны или вирусные бляшки. Интерферон I типа, действуя как противовирусное средство, препятствует размножению вируса, тем самым препятствуя образованию вирусных бляшек в монослое клетки-хозяина.

Протокол

1. Скрининг библиотеки цитокинов на вирусную инфекцию Зика

1. Высейте наивные клетки Vero по 1 х 10^{по 5} клеток в лунку с использованием 12-луночного планшета. Как только клетки прикрепятся (через 6 часов после посева), добавьте каждый цитокин в то
   Указанные концентрации в биологических дубликатах (объем 2 мл/лунка). Включите только управление транспортным средством (PBS).
2. Через 12 часов после обработки проводят инфекцию вирусом Зика (MOI 0,1 на 400 мкл на лунку). Включите отрицательные контрольные лунки без инфекции (макет).
3. Через 4 часа после заражения замените вирусный посев на обработанную цитокином среду (2 мл). Инкубируйте клетки при 37 °C в течение еще 44 часов.
4. Через 48 часов после заражения подсчитайте вирусные бляшки с помощью фазово-контрастного микроскопа и получите репрезентативные изображения инфицированных клеток при 40-кратном увеличении (рис. 1).

Результаты

Рисунок 1: Интерфероны демонстрируют мощную активность против вируса Зика. (A) График, показывающий модуляцию роста вируса Зика различными цитокинами по сравнению с контролем носителя. Средние значения и стандартное отклонение показаны на гистограмме. Интерфероны показали статистически значимое ингибирование репликации вируса Зика (значение p <0,05). (B

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Клеточная линия Vero	АТКС	ВКЛ-81
Вирусный штамм Зика PRVABC59	Центры по контролю и профилактике заболеваний (CDC)
Ил-6	Пепротех	200-06
Ил-1 альфа	Пепротех	200-01А
ФНО-альфа	Пепротех	300-01А
Интерферон альфа А	Системы НИОКР	11100-1
Интерферон бета	Пепротех	300-02 гг. до н.э.
Интерферон гамма	Пепротех	300-02
Центрифуга 5415R	Эппендорф	5415R
Центрифуга 5810R	Эппендорф	5810Р
Иммунофлуоресцентный микроскоп Nikon Eclipse Ti с технологией Nikon Intenselight C-HGFI	Компания Nikon

гг.