Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Метод in vitro для получения органоидов человеческого мозга

1.5K просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Gabriel, E., et al., Генерация органоидов человеческого мозга, полученных из iPSC, для моделирования ранних нарушений развития нервной системы. J. Vis. Exp. (2017)

Видео демонстрирует метод создания органоидов человеческого мозга из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток. Он показывает, как нейросфера образует нейроэктодермальный слой, который подавляет образование других зародышевых слоев. Нейросферы встраиваются в 3D-гелевую матрицу и образуют нейроэпителиальные почки. При инкубации с органоидными средами эти нейроэпителиальные почки дифференцируются в определенные области мозга, что приводит к образованию зрелых органоидов мозга.

Протокол

Все процедуры, связанные со сбором образцов, были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.

1. Генерация органоидов мозга (23 дня)

  1. Начало нейроэктодермы (5 дней)
    ПРИМЕЧАНИЕ:
    Перед началом дифференцировки следует учесть следующие моменты. Метод перепрограммирования (на основе лентивируса, сендай-вируса, эпизода или микроРНК и т.д.) для получения ИПСК человека в идеале должен быть одинаковым для всех пациентских и контрольных линий ИПСК. Доступны различные комплекты для перепрограммирования и инструкции на основе опубликованных протоколов. Качество ....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
ДМЭМ/Ф-12Gibco, США31331093Модифицированная среда Dulbecco: смесь питательных веществ F-12
ДорсоморфинСигма-Олдрич, СШАП5499Соединение С
Закладная средаАпплиХимА9011, 0100Mowiol; среда для встраивания; несколько поставщиков
Матрица Энгельбрета-Холма-Роя (EHS)Корнинг354277Матрица, сертифицированная для Matrigel hESC; важно: сертифицированная для hESC
инсулинСигма-Олдрич, СШАИ3536-100МГ
L-глютаминGibco, США25030081L-глютамин (200 мМ)
Средний АТехнологии стволовых клеток#05850mTeSR1 (среда hiPSC)
Средний BТехнологии стволовых клеток#05835Нейроиндукционная среда (NIM); нейродифференцировочная среда
Средний CGibco, США21103049Нейронная базальная среда
МЭМGibco, США11140035MEM раствор заменимых аминокислот (100x)
Набор для обнаружения микоплазмы MycoAlertЛонца, Швейцария#LT07-218Набор для обнаружения микоплазмы; несколько поставщиков
Пенициллин-стрептомицин (10.000 ЕД/мл)Gibco, США15140122
Реагент АТехнологии стволовых клеток# 05872 ReLSR (отбор и пропуск человеческих ЭС и iPS-клеток без ферментов); пожалуйста, следуйте протоколу производителя
Реагент БСигма-Олдрич, СШАА6964-100МЛРаствор Аккутазы - ферментативный раствор для диссоциации одиночных клеток; множественные поставщики; протокол 1.1.2 "Раствор для ферментативной диссоциации клеток"
Дополнение 1Gibco, США17502048Добавка N-2 (100 шт.)
Добавка 2 без витамина АGibco, США12587010Добавка B-27 (50x), минус витамин A
SB431542Selleckchem.comС1067
Колба для спиннера 250 млIBS Integra Bioscience182026
водонепроницаемый листКомпания БЕМИСРМ996Парафильм "М"
У-27632Selleckchem.comС1049РОК-ингибитор (Y-27632 2HCL)
β-меркаптоэтанолGibco, США313500102-меркаптоэтанол (50 мМ)

Больше статей

Индуцированные плюрипотентные стволовые клеткиформирование нейросфернейроэпителиальные почкивнеклеточный матрикс мембраныкультивирование в колбе Спиннерасреда для выращивания органоидов мозганейральная дифференцировканейроэктодермальный слойтрехмерный гелевый матрикс