Method Article

Генерация нервно-мышечных соединений с помощью микрофлюидного устройства

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Stoklund Dittlau, K. et al., Генерация двигательных единиц человека с функциональными нервно-мышечными соединениями в микрофлюидных устройствах.J. Vis. Exp. (2021)

Видео демонстрирует формирование нервно-мышечных соединений с помощью микрофлюидного устройства. Нервные клетки-предшественники и мышечные клетки-предшественники засеиваются в различные лунки внутри устройства и оставляются для созревания в моторные нейроны и миотрубки соответственно. Создание объемного и химического градиента приводит к развитию активных нервно-мышечных соединений.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные со сбором образцов, были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.

Все реагенты и оборудование, используемые в этом протоколе, перечислены в Таблице материалов и должны использоваться стерильно. Если не указано иное, среду следует нагреть до комнатной температуры (RT) перед использованием. Обзор протокола совместной культуры см. на рисунке 1.

1. Дифференцировка предшественников моторных нейронов из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSCs)

  1. Следуйте протоколу дифференцировки моторных нейронов, адапти....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Рисунок 1: Схематический обзор протокола моторных блоков в микрофлюидных устройствах.Временная шкала дифференцировки и обзор совместной культуры с 0-го по 28-й день в соответствии с хронологией протокола дифференцировки моторных нейронов. Дифференцировка моторных нейронов от ИПСК начинается в 0-й день и выполняется, как указано ранее, в течение следующих 10 дней. На 9 день аппарат стерилизуют и покры.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
уксусная кислотаCHEM-Lab NVКЛ00.0116.1000Компонент покрытия. Н226, Н314. П280
Агрин (рекомбинантный человеческий белок)Системы НИОКР6624-АГ-050Приложение к СМИ
аскорбиновая кислотасигмаА4403Мультимедийная составляющая
βIII-тубулин (Тубулин)АбкамАБ7751Антитела (1:500)
β-меркаптоэтанолThermo Fisher Scientific31350010Медийная составляющая. Н317. С280.
В-27 без витамина АThermo Fisher Scientific12587-010Мультимедийная составляющая
BDNF (нейротрофический фактор мозга)Пепротех450-02ВФактор роста
bFGF (рекомбинантный основной фактор роста фибробластов человека)Пепротех100-18ВФактор роста
Коллаген из телячьей кожиThermo Fisher Scientific17104019Компонент покрытия
CNTF (цилиарный нейротрофический фактор)Пепротех450-13ВФактор роста
ДАПТТокрис Бионаука2634Приложение к СМИ
DMEM/F12Thermo Fisher Scientific11330032Мультимедийная составляющая
ДмсосигмаD2650-100МЛКомпонент криоконсервации. Н315, Н319, Н335. С280.
Фосфатно-солевой буфер Дульбекко (DPBS)Thermo Fisher Scientific14190250Без кальция, без магния
этанолВВРNo 20.821.296стерилизация. Н225. П280
Фетальная бычья сывороткаThermo Fisher Scientific10270106Мультимедийная составляющая
Флуоресцентная монтажная средаДакоС3023Иммуноцитохимический компонент
GDNF (нейротрофический фактор, полученный из глиальной клеточной линии)Пепротех450-10ВФактор роста
Сыворотка для лошадейThermo Fisher Scientific16050122Мультимедийная составляющая
ИМДМThermo Fisher Scientific12440053Мультимедийная составляющая
Инсулин трансферрин селенThermo Fisher Scientific41400045Мультимедийная составляющая
Замена нокаутирующей сывороткиThermo Fisher Scientific10828-028 (Английский)Компонент криоконсервации
Ламинин из базальной мембраны саркомы мышей Engelbreth-Holm-SwarmсигмаЛ2020-1МГКомпонент покрытия и добавка к фильтрующему материалу
L-глютаминThermo Fisher Scientific25030-024 (Английский)Мультимедийная составляющая
Дополнение N-2Thermo Fisher Scientific17502-048Мультимедийная составляющая
Нейробазальная средаThermo Fisher Scientific21103049Покрытие и компонент среды
Заменимые аминокислотыThermo Fisher Scientific11140050Мультимедийная составляющая
Парапленка МсигмаП7793-1ЭАСкладское оборудование
Пенициллин/стрептомицин (5000 ЕД/мл)Thermo Fisher Scientific15070063Мультимедийная составляющая
Чашка Петри (3 см)НУНК153066Диаметр: 3 см
Чашка Петри (10 см)Сарштедт833.902 Пакет услуг 833.902Диаметр: 10 см
Тарелка (6-луночная)Cellstar Greiner bio-one657160 (АнглийскийКультуральная пластина
Поли-L-орнитин (PLO)сигмаП3655-100МГКомпонент покрытия
Ретиноевая кислотасигмаР2625Приложение к СМИ. Н302, Н315, Н360FD, Н410. С280.
Клеточная добавка RevitaThermo Fisher ScientificA2644501Раствор ингибитора ROCK
Разглаженный агонистМерч MilliporeNo 566660Приложение к СМИ
Пируват натрияТехнологии Life11360-070 (Английский)Мультимедийная составляющая
Колба Т75сигмаCLS3276Культуральная пластина
TrypLE экспрессThermo Fisher Scientific12605010Решение для диссоциации MAB
Пентагидрат тубоцирарина гидрохлоридасигмаТ2379-100ГБлокатор ацетилхолиновых рецепторов. Н301. С280.
Предварительно собранное микрофлюидное устройство XonaChipsXona MicrofluidicsХК150Длина микроканавки: 150 μм
г. )

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Neuromuscular JunctionsMicrofluidic DeviceNeural Progenitor CellsMuscle Progenitor CellsMotor NeuronsMyotubesMicrogroovesCell SeedingGrowth MediumDifferentiation Medium

Related Articles