Простой метод выделения и культивирования мышиных астроцитов

Аннотация

Источник: Wolfes, A. C., et al., Культивирование мышиных астроцитов in vivo с использованием быстрого, простого и недорогого протокола AWESAM. J. Vis. Exp. (2018)

Видео демонстрирует простой метод культивирования мышиных астроцитов изолированно от других клеток мозга. Во время культивирования, используя астроцит-специфичные среды и подавляя адгезию неастроцитарных клеток, метод селективно культивирует астроциты. Эти культивируемые астроциты демонстрируют звездчатую морфологию с тонкими отростками.

Протокол

Все процедуры, связанные со сбором образцов, были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.

1. Вскрытие мозга крысы или мыши

ПРИМЕЧАНИЕ: Можно использовать как мышей, так и крыс. Также можно использовать животных старше P8 (мы тестировали до P12), но удаление мозговых оболочек будет становиться все более трудным. Кроме того, выход клеток и их здоровье уменьшатся, поскольку в клетках мозга старых животных будут формироваться сложные процессы и связи, которые могут разорваться во время диссоциации тканей, что приведет к увеличению гибели клеток. Препараты коры головног....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
0,05% трипсин-ЭДТА	Gibco	25300054	согреть на водяной бане 37 ºC перед использованием
0,25% трипсин-ЭДТА	Gibco	No 25200-056	согреть на водяной бане 37 ºC перед использованием
Добавка к B-27	Gibco	17504-044	Стоковый в 50X
Глутамакс	Gibco	35050-061 (Английский)	Сток в 100X
Пенициллин/стрептомицин	Gibco	15070-063	50 бульон; пенициллин: 5000 ед/мл; стрептомицин: 5000 мкг/мл
Нейробазальная среда	Gibco	21103049	Без L-глютамина
DMEM	Gibco	41966029
ХБЕГФ	сигма	No 4643
ХЕПЕС	Gibco	15630080
HBSS	Gibco	14170112
ФТС	Gibco	10437028
ПБС	Gibco	10010049	В 1 раз
Нейлоновое сетчатое фильтр 100 μм	БД	No 352360 (Английский
Трипан синий	сигма	Т8154
Инкубатор для клеточных культур	Thermo Fisher Scientific	Инкубатор для клеточных культур Hera Cell 240i
Лабораторный шейкер	Гейдольф	Ротамакс 120	Использование в инкубаторе для клеточных культур
центрифуга	Эппендорф	5810 Р

)