Подготовка клиновидных срезов мозга для визуализации слуховых нейронов

Abstract

Источник: Fischl, M. J. et al., In vitro Wedge Slice preparation for imimicing in vivo Neuronal Circuit Connectivity.J. Vis. Exp.(2020)

Это видео демонстрирует процесс приготовления клиновидных срезов мозга в лабораторных условиях. С помощью вибратома создается клиновидный срез мозга мыши различной толщины. Этот срез содержит корешок слухового нерва, расположенный на более толстом конце, в то время как нейроны, связанные со слухом, расположены на более тонком конце.

Protocol

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Удаление мозга с неповрежденным корешком слухового нерва для стимуляции

ПРИМЕЧАНИЕ: Мыши для этих экспериментов были получены путем скрещивания трансгенных мышей ChAT-IRES-Cre на фоне C57BL/6J с мышами-репортерами tdTomato (Ai14). У мышей, используемых для гистологии и электрофизиологии, наблюдалось начало после слуха (P14-P23), что составляет около P12 у мышей. Нейроны, экспрессирующие tdTomato в вентральном ядре трапециевидн....

Results

Рисунок 1: Схема клинового среза и пример изображения. (A) Схема медиальной оливокоулеарной цепи обратной связи. Синие стрелки указывают афферентный восходящий путь к нейронам MOC, а черные стрелки указывают нисходящий путь обратной связи от нейронов MOC к основанию наружных волосковых клеток (OHC). (B) Светлопольное изображение клиновидного среза с метками корешка с.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Экспериментальная подготовка
Агар, порошок	Научный центр Фишера	BP1423500	4% агаровый блок используется для стабилизации мозговой ткани во время вибратомного секционирования
АлексаФтор Гидразид 488	Инвитроген	А10436	Флуорофор, используемый во внутреннем растворе для подтверждения успешного нейронного патча MOC
аналитические весы	Geneses Scientific (Интрамоллы)	АВ114	Взвешивание химических реагентов
Лезвие бритвы обоюдоострое	Тед Пелла	121-6	Вибратомное режущее лезвие
Кинуреновая кислота (5 г)	Сигма Олдрич	К3375-5Г	Добавка ACSF для слайсинга используется для снижения активности нейронов во время диссекции и срезов с целью улучшения здоровья тканей при зажиме пластыря
pH-метр	Fisher Scientific (Интрамоллы)	Тел.: 13-620-451	Раствор рН-тестера
Пластиковые чашки Петри диаметром 100 мм X 20 мм	Fisher Scientific (Интрамоллы)	Тел.: 12-556-002	4% Приготовление агара
Конфорка для перемешивания	Fisher Scientific (Интрамоллы)	Телефонный номер 11-500-150	Подогрев для приготовления 4% агара
Рассечение и нарезка
Биоцитин	Сигма Олдрич	В4261-250МГ	Химическое вещество, используемое для отслеживания аксонов (конъюгировано со стрептавидином 488)
Препарирующий микроскоп	Амскоп	СМ-1БН	Для прецизионной диссекции при удалении мозга
Щипцы Dumont #5	Инструменты для точной науки	11252-20	Инструмент для рассечения тонких щипцов
Эконом пинцет #3	ВПИ	501976	Инструмент для рассечения щипцов
Стеклянная чашка Петри диаметром 150 мм x 15 мм H	Fisher Scientific (Интрамоллы)	08-747E	Диссекционная чашка
Интерфейсная бумага (мембрана PCTE 203 x 254 мм, 10 мкм)	Томас Сайенти	1220823	Инкубация срезов/применение биоцитина
Leica VT1200S вибратом	Лейка	1491200С001	Вибратом для секционирования клиновых ломтиков
Ножницы Майо	Робоз	РС-6872	Инструмент для рассечения
Однолезвийные лезвия из углеродистой стали	Fisher Scientific (Интрамоллы)	12-640	Бритвенное лезвие для препарирования
Диск для образцов, ориентация	Лейка	14048142068	Специализированный вибратомный столик для воспроизводимого наклона
Ложка	Компания FisherSci	Телефонный номер 14-375-10	Инструмент для рассечения
Суперклей	Ньюэгг	15187	Используется для приклеивания ткани к вибратомной ступени
Весенние ножницы Vannas	Инструменты для точной науки	91500-09	Инструмент для рассечения