Генерация нейрональных клеток из плюрипотентных стволовых клеток, полученных из крови

Аннотация

Источник: Becker-Kojić, Z. A., et al. Генерация нейронных клеток, полученных из крови, без ГМ. J. Vis. Exp. (2021).

Это видео демонстрирует метод создания нейрональных клеток из плюрипотентных стволовых клеток, полученных из крови (BD-PSCs). BD-ПСК получают путем перепрограммирования клеток-предшественников крови. Недифференцированные BD-ПСК культивируют на покровных стеклах, покрытых субстратом клеточных культур, с использованием нейронной индукционной среды и нейронной дифференцировочной среды, что вызывает дифференцировку в клетки с нейрональным фенотипом.

Протокол

При проведении экспериментов были получены этические одобрения.

1. Выделение мононуклеарных клеток периферической крови человека (PBMNC)

1. Убедитесь, что все доноры подписали информированное согласие перед забором крови в соответствии с рекомендациями учреждения.
2. Возьмите 30 мл крови у здоровых доноров обученным медицинским персоналом в соответствии со стандартным протоколом.
3. Изолируйте PBMNC с помощью градиентной среды. Используйте 10 мл среды с 25 мл крови 1:1, разбавленной фосфатно-солевым буфером (PBS), и центрифугируйте при 300 x g в течение 30 минут.
4. Изолируйте межфазны....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Фракция альбумина V	Рот	Т8444.4
Комплект для обеспечения жизнеспособности клеток AO/PI	Биозим	872045	Biozym снят с производства Продукт производства компании Logos Biosystems.
Аскорбиновая кислота 2-фосфат секвимагнис	Сигма Олдрич	А8960-5G
B27 Сыворотка без 50x	Fisher Scientific (Gibco)	11530536
Базовое решение FGF	Fisher Scientific (Gibco)	10647225
Биоколл	Мерк Миллипор	L6115-BC	Фильтрующие материалы с градиентом плотности
БСА ГРП V 7,5%	Gibco	15260037
CD45 Микрогранулы	Милтеньи	Тел.: 130-045-801	наноразмерные магнитные шарики
Слайды для подсчета клеток Luna	Биозим	872010	Biozym снят с производства Продукт производства компании Logos Biosystems.
D-MEM/F12	Мерк Миллипор	FG4815-BC
ФБС	Мерк Миллипор	С0115/1030Б	Прекращено. Доступно под номером: TMS-013-B
GDNF рекомбинантный человек	Fisher Scientific (Gibco)	10679963
ГлутаМакс 100x	Gibco	35050038	L-глютамин
Гепариново-натриевая ячейка	Сигма-Олдрич	Х3149-50КУ
BDNF человека	Fisher Scientific (Gibco)	11588836
Исков (IMDM)	Биохром	ФГ0465
Мышь Ламинин	Fisher Scientific (Gibco)	10267092
Автоматический счетчик ячеек Luna FL	Биозим	No 872040	Biozym снят с производства Продукт производства компании Logos Biosystems.
Буфер MACS	Милтеньи	Тел.: 130-091-221
MEM NEAA 100x	Gibco	11140035
MiniMACS Trennsäulen	Милтеньи	Тел.: 130-042-201
Multiplatte Nunclon 4 лунки	Научный центр Фишера	10507591
Доплата N2 100x	Fisher Scientific (Gibco)	11520536
Нейробазальная среда	Gibco	10888022
PBS стерильный	Рот	9143.2 Телефон 9143.2
Поли-L-орнитин	Сигма-Олдрич	П4957-50МЛ