Методическая статья

Дифференцировка индуцированных нейральных клеток-предшественников в астроциты

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Meyer, S., et al., Edenhofer, F. Получение фибробластов взрослого человека и их прямое преобразование в расширяемые нейронные клетки-предшественники. J. Vis. Exp. (2015)

Это видео демонстрирует процесс дифференцировки индуцированных нейронных клеток-предшественников (iNPC) в нейроны и астроциты с использованием специализированных сред.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Дифференциация iNPC

  1. Дифференцировка в сторону нейрональной линии
    1. Культивируйте клетки на планшетах, покрытых ламинином, как описано выше. Измените среду на нейро-дифф-медиа (DMEM/F-12, 1x N2, 1x B27, 300 нг/мл цАМФ, 200 мкМ витамин С, 10 нг/мл BDNF, 10 нг/мл GDNF), когда клетки слиты примерно на 70%. Меняйте носители через день в течение трех недель. Не расщепляйте клетки во время дифференцировки.
    2. Через три недели клетки должны экспрессировать нейрональный маркер TUJ1. Чтобы получить более зрелые нейроны и нейронные подтипы, продолжайте дифференцировку до 3 месяцев.
  2. Дифференциация в сторону глиальной линии
    1. Смените среду на глиальную индукционную среду (1:1 DMEM/F-12: нейробазальная, 1x N2, 1x B27, 10 мкМ β-меркаптоэтанол, 100 мкМ заменимых аминокислот, 1,5 мМ L-глутамин, 5 мкг/мл инсулина, 40 нг/мл T3), включая 20 нг/мл EGF, для индуцирования дифференцировки в глиальные клетки-предшественники. Удалите половину среды и заменяйте ее свежей через день в течение примерно 2 недель. В течение этого периода клетки должны быть разделены в соотношении 1:3 в присутствии 10 мкМ ингибитора ROCK Y27632 при достижении 100% конфлюенции.
    2. Через 2 недели дифференцируйте клетки дальше в астроциты: когда клетки почти сливаются, смените среду на коммерчески доступную астроцитарную среду, меняйте среду каждый второй день. Примерно через 7 дней клетки начинают экспрессировать маркеры астроцитов (например, GFAP). Если клетки получают 100% слияние во время протокола дифференцировки, разделите их в соотношении 1:2 в присутствии 10 μМ ингибитора ROCK Y27632.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Астроцитарные средыScienCell1801 г
В27Технологии LifeTechnologies17504-044
БДНФПепротех450-02
лагерьсигмаА6885
DMEMТехнологии LifeTechnologies41966-029
ДМЕМ Ф12Технологии LifeTechnologies11320-033
ДмсоРот4720
ДПБСТехнологии LifeTechnologies14190-094
ЭФРТехнологии LifePHG0313
ФТСБиохром АГ50115
ГДНФПепротех450-10
инсулинСералабГЭМ-700-112-
L-глютаминТехнологии LifeTechnologies25030-024 (Английский)
ЛамининсигмаЛ2020
N2Технологии LifeTechnologies17502-048
НейробазальныйТехнологии LifeTechnologiesNo 21103-049
Заменимые аминокислотыТехнологии LifeTechnologies11140-050
Витамин СсигмаА4544
β-меркаптоэтанолТехнологии LifeTechnologies21985023
.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

TuJ1Rho

Похожие статьи