Выделение клеток из сенсорных ганглиев

Аннотация

Источник: Kaelberer, M. M., et al. Метод нацеливания и изоляции иннервирующих дыхательные пути сенсорных нейронов у мышей. J. Vis. Exp. (2016).

Это видео демонстрирует выделение клеток из сенсорных ганглиев мышей. Ганглии подвергаются ферментативному расщеплению для растворения внеклеточного матрикса. Затем отдельные клетки собираются путем фильтрации через сетчатый фильтр с последующим центрифугированием с градиентом плотности для удаления мусора. Наконец, проводится промывка и центрифугирование для сбора выделенных клеток для последующего анализа.

Протокол

Все процедуры, связанные со сбором образцов, были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.

1. Диссоциация сенсорных ганглиев

1. Нанесите пипеткой 500 мкл раствора для диссоциации ганглиев (GaDS) (Таблица 1), оставив ганглии в пробирке. Промойте ганглии один раз, добавив 1 мл фосфатного буферного раствора (PBS), подождите, пока ганглии осядут на дно пробирки, а затем отдайте PBS пипеткой.
2. Добавьте 1 мл GaDS и 22 мкл фермента для пищеварения (коллагеназа I/II и смесь протеазы, 2,5 мг/мл в воде) в каждую пробирку.
3. Добавьте 20 μл Fast Blue (5,26 мМ) в положительную ....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Фосфатный буферный солевой раствор (PBS) Дульбекко не содержит Ca и Mg	Gibco	14190-144
Усовершенствованный DMEM/F12	Gibco	12634-010
глутамин (Глутамакс)	Gibco	35050-061 (Английский)
ХЕПЕС	Gibco	15630-080 (Английский)
N2	Gibco	17502-048
B27 (без витамина А)	Gibco	12587-010
Фактор роста нервов (NGF)	сигма	Н6009	стоковый 50 мкг/мл в PBS/10% FBS
фермент для пищеварения, Liberase DH Research Grade	Рош	5401054001	запас 2,5 мг/мл в воде
раствор частиц (Percoll)	сигма	П1644-25МЛ
Нагревательный блок	ЛабНет
Сетчатый фильтр для ячеек 70 мкм	сокол	No 352350 (Английский

гг. )