Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Препарирование эндотелиальных трубок головного мозга из паренхиматозных артериол мыши

815 просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Хаким, М. А., и др., Выделение и функциональный анализ артериолярного эндотелия паренхимы мозга мыши. J. Vis. Exp. (2022)

Это видео демонстрирует метод выделения эндотелиальных трубок из церебральной паренхимы мыши. Благодаря сочетанию ферментативного разложения и механической диссоциации в результате этого процесса получается неповрежденная трубка с эндотелиальными клетками.

Протокол

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных.

1. Растворы и лекарства

  1. Физиологический раствор соли (ПСС)
    1. Приготовьте минимум 1 л PSS, используя 140 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2 мМ CaCl2, 1 мМ MgCl2, 10 мМ N-2-гидроксиэтилпиперазина-N'-2-этансульфоновой кислоты (HEPES) и 10 мМ глюкозы.
    2. Приготовьте необходимые растворы с недостаточным CaCl2 (ноль Ca2+ PSS) для рассечения артериол головного мозга и выделения эндотелиа....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

figure-results-1
Рисунок 1: Диссекция и изоляция паренхиматозных артериол. (А) Изолированный мозг мыши с неповрежденным Виллисовым кругом. (B) Рассеченный прямоугольный кусок ткани мозга, содержащий MCA (белая стрелка). (В) Выделение пиа из верхней части ткани (артериола, синяя стрелка). (D) Артериолы (обведены синими стрелками), соединенные со средними мозговыми артериями (желтые стрелки). (E) Идентифицированная арт.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Чиллер для ванны (Isotemp 500LCU)ThermoFisher Scientific13874647
Капилляры боросиликатного стекла (Pinning)Уорнер ИнструментсГ150Т-6
Капилляры из боросиликатного стекла (острые электроды)Уорнер ИнструментсГК100Ф-10
Капилляры из боросиликатного стекла (Растирание)World Precision Instruments (WPI), Сарасота, Флорида, США1В100-4
BSA: Бычья сыворотка альбуминсигмаА7906
CaCl2: хлорид кальциясигма223506
Коллагеназа (смесь типа H)сигмаС8051
Дигитировщик сбора данныхMolecular Devices, Саннивейл, Калифорния, СШАDigidata 1550А
Чашка для вскрытия (стеклянный Петри с угольным дном Sylgard)Контрольно-измерительные приборы для живых систем, Сент-Олбанс-Сити, Вермонт, СШАДД-90-С-БЛК
ДитиоэритритолсигмаД8255
ДМСО: ДиметилсульфоксидсигмаД8418
Эластаза (поджелудочная железа свиньи)сигмаЕ7885
Клапан регулирования расходаУорнер ИнструментсФР-50
Интерфейс флуоресцентной системы, дуговая лампа и источник питания, гиперпереключатель и ФЭУMolecular Devices, Саннивейл, Калифорния, СШАСистемы IonOptix
Щипцы (с тонким наконечником, заточенные)ФСТДюмон #5 и Дюмон #55
глюкозаSigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США)Г7021
HEPES: (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновая кислота)сигмаН4034
KCl: хлорид калиясигмаП9541
MgCl2: хлорид магниясигмаМ2670
микроманипуляторСискиюМХ10
Съемник микропипеток (цифровой)Sutter Instruments, Новато, Калифорния, США-97 или-1000
Микроскоп (инвертированный Nikon)Nikon Instruments Inc, Мелвилл, штат Нью-Йорк, СШАЦ2
Микроскоп (инвертированный Nikon)Компания Nikon Instruments IncЗатмение TS100
Предметный столик для микроскопа (алюминий)Сискию, Грантс-Пасс, Орегон, США8090П
Контроллер микрошприцевого насосаWorld Precision Instruments (WPI), Сарасота, Флорида, СШАSYS-MICRO4
NaCl: хлорид натриясигмаС7653
папаинсигмаП4762
Объективы фазового контрастаКомпания Nikon Instruments Inc(Ph1 DL; 10X & 20X)
Ножницы (лезвия 3 мм и 7 мм)Fine Science Tools (или FST), Фостер-Сити, Калифорния, СШАMoria MC52 и 15000-00
Ножницы (в стиле Ванны; лезвия 9,5 мм и 3 мм)Мировые прецизионные приборы555640С, 14364
Регулятор температуры (двухканальный)Уорнер ИнструментсTC-344B или C
Система управления клапанамиУорнер ИнструментсВК-6

Больше статей

Ферментативное перевариваниемеханическая диссоциацияпипетированиекоктейль протеолитических ферментовдиссекция мозга мышиизоляция артериолподготовка эндотелиальных клетокдиссоциация тканей