Выделение нейронов из Caenorhabditis elegans с помощью сортировки клеток, активируемых флуоресценцией

Аннотация

Источник: Германия, E. M., et al. Выделение специфических популяций нейронов из круглых червей Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует выделение флуоресцентно меченых нейронов из Caenorhabditis elegans. Клеточную суспензию получают из трансгенных червей, сконструированных для экспрессии флуоресцентных белковых везикулярных трансмембранных транспортеров в холинергических нейронах. Затем флуоресцентно помеченные нейроны изолируют с помощью флуоресцентно-активируемой сортировки клеток (FACS) и поддерживают в культуре.

Протокол

1. Подготовка и сбор старых червей для выделения клеток

1. Соберите червей и подготовьте буферы для изоляции клеток.
   1. Соберите червей в коническую пробирку объемом 15 мл. Промыть червей с планшета 1,5 мл буфера M9 (1 мМ MgSO₄, 85 мМ NaCl, 42 мМ Na₂HPO₄·7H₂O, 22 мМ KH₂PO₄, pH 7,0) и центрифугировать в течение 5 мин при 1 600 x g. Выбросьте надосадочную жидкость и промойте червей 1 мл буфера M9. Повторите центрифугирование и промойте в общей сложности пять раз, чтобы удалить как можно больше загрязнения Escherichia coli.
      ПРИМЕЧАНИЕ:

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
6-луночный планшет	Научный центр Фишера	Тел.: 12-556-004
Агар, класс молекулярной биологии	ВВР	А0930
CaCl2	сигма	С5670
Автоматический счетчик ячеек Contess	Инвитроген	Z359629
ДТТ	USBиология	Д8070
ФБС	Омега Сайентифик	ФБ-02
ХЕПЕС	сигма	Н3375
KCl	Амреско	О395
КХ2ГО4	USBиология	П5110
Кимвайпс	Специалисты компании «Кимберли-Кларк»	7552
L-15 Лейбовица Средний	Gibco	21083027
MgCl2	сигма	М8266
MgSO4	USBиология	М2090
Na2HPO4·7H2O	USBиология	С5199
NaCl	ВВР	Х190
NaOCl (Отбеливатель)	Клорокс
НаОХ	Амреско	О583
Пенициллин-стрептомицен	Научный центр Фишера	15140122
Пептон Y	USBиология	П3306
Проназа Е	сигма	7433	смесь протеаз от Streptomyces griseus
Паспорт безопасности	Амреско	О227
Флуоресцентный стереомикроскоп SMT1-FLQC	Исследования Tritech
сахароза	USBиология	С8010