Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Дифференцировка клеток-предшественников глазного отика в сенсорные эпителиальные клетки с последующим иммуноокрашиванием

607 просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Азаде, Д. и др., Инициирование дифференцировки в иммортализированных мультипотентных клетках-предшественниках Отика.J. Vis. Exp. (2016).

Это видео демонстрирует дифференцировку иммортализованных мультипотентных клеток отического предшественника (iMOP) в сенсорные эпителиальные клетки. В нем описаны этапы, связанные с культивированием клеток iMOP, формированием отосфер, индуцированием дифференцировки и визуализацией клеточных компонентов и маркеров дифференцировки с помощью флуоресцентной микроскопии для подтверждения успешной дифференцировки клеток.

Протокол

1. Поддержание самообновления в клетках IMOP

  1. Готовят питательные среды iMOP: DMEM/F12, 1X добавку B27, 25 мкг/мл карбенициллина и 20 нг/мл основного фактора роста фибробластов (bFGF). Внесите 50 мл питательных сред iMOP с использованием стерильных реагентов. Разогрейте 49 мл DMEM/F12 в конической форме объемом 50 мл на водяной бане при температуре 37 °C.
    1. Разморозьте добавку 50X B27 и процедите стерилизованные 100 мг/мл аликвоты карбенициллина в течение 5 минут на водяной бане при температуре 37 °C. Разморозьте 100 мкг/мл аликвоты bFGF при RT. Добавьте 1 мл 50X B27, 10 мкл 100 мкг/мл bFGF и 12,5 мкл 100 мг/мл карбенициллина в DM....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
1,5 Толщина стеклянного покровного стекла (круглый 12 мм)Науки электронной микроскопии72230-01
DMEM/F12Технологии Life11320-082 (Английский)
Фосфатно-солевой буфер (PBS) pH 7,4Технологии Life10010-023
Сбалансированный солевой раствор Хэнка (HBSS)Технологии Life14025-092
Добавка B27 (50X) Без сывороткиТехнологии Life17504-044Хранится в виде аликвот по 1 мл
Крепление Prolong Gold Antifade MountantТехнологии Life47743-736Хранится в виде 10 мг/мл 100 мкл аликвот
Автоматический счетчик ячеек Moxi Z MiniОрфло МХЗ001
Кассета Moxi Z Тип SОрфло МСК002
Рекомбинантный фактор роста мышиных фибробластов, основной (bFGF)Пепротех450-33Ресуспендирован в 0,1% БСА в H20 и хранится в виде аликвот 20 мг/мл
Карбенициллин, динатриевая сольThermo Fisher ScientificБП2648-1Ресуспендирован в 10 мМ Hepes pH 7,4 и хранится в виде аликвот 100 мг/мл
Пипетка 5 мл в индивидуальной упаковке в мягкой обложке (200/футляр)Thermo Fisher Scientific1367811Д
Пипетка 10 мл в индивидуальной упаковке в мягкой обложке (200/футляр)Thermo Fisher Scientific1367811П
Обработанная культурой тканей чашка 6 смThermo Fisher Scientific130181
Наконечник для фильтра TipOne 0,1-10 мкл удлиненный наконечник фильтраСША Сайентифик1120-3810
Наконечник для фильтра TipOne 1-20 мклСША Сайентифик1120-1810
Наконечник для фильтра TipOne 1-200 мклСША Сайентифик1120-8810 (Английский)
Наконечник для фильтра TipOne 101-1000 мклСША Сайентифик1126-7810 (Английский
Конические тубы 15 мл стерильные 20 пакетиков по 25 туб (500 туб)США Сайентифик1475-0511
Конические тубы 50 мл стерильные 20 пакетиков по 25 туб (500 туб)США Сайентифик1500-1211
гг. гг. ) гг.

Больше статей

Формирование отосфердифференцировка клетокфлуоресцентная микроскопияпротокол иммуноокрашиванияпервичные антителавторичные антителаокрашивание фаллоидиномкраситель для связывания ДНК