Генерация срезов медиального таламуса и передней поясной коры из мозга мышей

Аннотация

Источник: Lu, H., et al. Стимуляция постоянным током и регистрация многоэлектродной матрицы судорожной активности при приготовлении среза мозга мышей. J. Vis. Exp. (2016)

Видео демонстрирует подготовку срезов медиального таламус-передней поясной коры (MT-ACC) из мозга мышей. Мозг мыши препарируется, делаются надрезы, чтобы обнажить путь MT-ACC, и срезы генерируются с помощью вибратома. Затем срезы MT-ACC поддерживаются в насыщенной кислородом искусственной спинномозговой жидкости.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка срезов мозга

1. Используйте самцов мышей C57BL/6J в возрасте 4-8 недель. Размещение животных в помещении с кондиционером (21-23 °C; влажность 50%; цикл свет/темнота 12 часов/12 часов, свет включается в 8:00 утра) со свободным доступом к еде и воде.
2. Возьмите 250 мл аликвоты искусственной спинномозговой жидкости (АКХЛ) и поместите ее в стакан, содержащий лед. В то же время подает непрерывный газ, состоящий на 95% из_O2 и на 5% из_CO2.
3. хирургия
   1. Обезболивайте животное 4% изофлураном в стеклянной коробке примерно на 3 мин. Как только животное достигнет хирургической глубины анестезии (на что указывает отсутствие реакции на защемление пальцев ног), поместите его на неглубокий поднос, наполненный колотым льдом, и удалите голову с помощью ножниц.
   2. Обнажите череп и обрежьте оставшиеся мышцы. Далее, с помощью ронжеров, отделите дорсальную поверхность черепа от мозга. Обрежьте бока черепа с помощью ронжеров. Стерилизуйте все хирургические инструменты 75% раствором этанола.
   3. С помощью шпателя разрежьте обонятельные луковицы и нервные соединения вдоль вентральной поверхности мозга, и удалите мозг. После обезглавливания быстро перенесите мозг в стакан, наполненный ледяным кислородом aCSF.
4. Получение среза медиального таламуса (МТ)-передней поясной коры (АКК) мозга
   заметка: Подготовьте срезы, содержащие путь от машинного перевода к ACC.
   1. Вручную разрежьте мозговой блок двумя сагиттальными надрезами на 2,0 мм латеральнее средней линии в каждом полушарии, чтобы отобразить подкорковую анатомию. Затем сделайте два угловых надреза. Сделайте первый поперечный разрез параллельно видимому волокнистому тракту в полосатом теле
   .
   2. Сделайте второй поперечный разрез от соединения между мозжечком и зрительной корой до средней точки между передней спайкой и зрительным трактом, которые вентральны и параллельны таламоцингулированному пути.
   3. Прикрепите мозговой блок к угловой пластине (~120°) с помощью цианоакрилатного клея и сделайте надрез чуть выше точки поворота дорожки. Разверните пластину, расплющите ее и приклейте к камерному столику вибратома.
   4. Сделайте медиальные срезы мозга таламус-ACC (толщиной 500 мкм), а затем погрузите их в ледяной кислород aCSF. Переложите срезы в камеру записи и держите при температуре 32 °C в условиях непрерывной перфузии (12 мл/мин) с кислородосодержащим aCSF в течение 1 часа.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
анестезирующий:
Изофлуран	Корпорация Halocarbon Products	НДЦ 12164-002-25	4%
aCSF (всего:1L):
D(+)-глюкоза	Мерк	1.08337.1000	10 мМ
Гидрокарбонат натрия	Мерк	1.06329.0500	25 мМ
Хлорид натрия	Мерк	1.06404.1000	124 мМ
(+)-L-аскорбат натрия, >=98%	сигма	А4034-100Г	0,15 г / 2 с.к.
Магния сульфат, безводный, РеагентПлюс	сигма	М7506-500Г	2 мМ
Дигидрат хлорида кальция	Мерк	1.02382.1000	2 мМ
Натрия дигидрофосфата моногидрат	Мерк	1.06346.1000	1 мМ
Хлористый калий	Мэй & Бейкер ЛТД, Дагенхэм, Англия	МС 7616	4,4 мМ