Создание конфигурации цельной клетки для двухфотонной визуализации кальция в срезах мозга

Аннотация

Источник: Camiré, O., et al. Двухфотонная визуализация кальция в нейронных дендритах в срезах мозга. J. Vis. Exp. (2018).

Это видео демонстрирует протокол для записи целых клеток и двухфотонной визуализации кальция в срезах гиппокампа мозга. Этот метод позволяет изучать динамику локальных переходных процессов^Ca2+ (CaT) в дендритах разных типов нейронов в острых срезах мозга.

Протокол

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующей экспертизой по этике животных.

1. Предварительная подготовка (необязательно: подготовка за 1 день)

1. Приготовьте три вида раствора искусственной спинномозговой жидкости (ACSF) (Нормальный, Сахарозный и Восстановительный растворы, по 1 л каждый; см. табл. 1). Отрегулируйте осмоляльность растворов до 300 ± 10 мОм и охладите сахарозу ACSF до температуры, близкой к замерзанию (0-4 °C).
   заметка: Использование режущего раствора с низким содержанием натрия (ACSF-Sucrose) помогает сохранить жизнеспособность н....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Животный штамм: мышиный CD1	Чарльз Ривер	22
Хлорид кальция	Сигма-Олдрич	С4901
D-(+)-глюкоза	Сигма-Олдрич	Г8270
ХЕПЕС	Сигма-Олдрич	Н3375
Хлорид магния	Сигма-Олдрич	М8266
Гептагидрат сульфата магния	Сигма-Олдрич	230391
Порошок параформальдегида, 95%	Сигма-Олдрич	158127
Хлористый калий	Сигма-Олдрич	П3911
Глюконат калия	Сигма-Олдрич	С1847
Азид натрия	Сигма-Олдрич	С2002
Бикарбонат натрия	Сигма-Олдрич	С8875
Хлорид натрия	Сигма-Олдрич	С5886
сахароза	Сигма-Олдрич	С9378
Тритон Х-100	Сигма-Олдрич	Т9284
База Тризма	Сигма-Олдрич	Т1503
Тризма гидрохлорид	Сигма-Олдрич	Т3253
Натрия фосфат двухосновной дигидрат	Сигма-Олдрич	71643
Натрия фосфат моноосновный моногидрат	Сигма-Олдрич	С9638
Биоцитин	Сигма-Олдрич	В4261
Alexa Fluor 594 Гидразид	ThermoFisher Scientific	А10438
SR95531 (Габазин)	Абкам	АБ120042
Аденозинтрифосфат (АТФ)-Трис	Сигма-Олдрич	А9062
Гуанозин (ГТФ)-Na+	Сигма-Олдрич	Г8877
Орегон Грин BAPTA-1	ThermoFisher Scientific	О6812
Соль фосфокреатина ди(триса)	Сигма-Олдрич	С1937
Стрептавидин-конъюгированный Alexa-546	ThermoFisher Scientific	С11225
Патч для капилляров из боросиликатного стекла	Мировые прецизионные приборы	1В100Ф-4
Тетаборосиликатные стеклянные капилляры	Инструмент Саттера	БТ-150-10
P-97 Съемник для микропипеток Flaming/Brown	Инструмент Саттера
TCS SP5 Конфокальный многофотонный микроскоп	Leica Microsystems
Chameleon Ultra II Ti:Сапфировый многофотонный лазер	когерентный
Программное обеспечение для сбора изображений LAS AF	Leica Microsystems
Регулятор температуры TC-324B	Уорнер Инструментс
Усилитель MultiClamp 700B	Молекулярные приборы
Дигитайзер Digidata 1440A	Молекулярные приборы
Конфокальный транслятор	Сискию
микроманипулятор	Сискию
Программное обеспечение для сбора данных pClamp	Молекулярные приборы
A365 Изолятор стимулов постоянного тока	Мировые прецизионные приборы
Оптический стол Vibraplane	Кинетические системы