Установка оптических окон в мозг трансгенных мышей для визуализации нейронной активности

Аннотация

Источник: Lin, X., et al. Визуализация нейронной активности в первичной соматосенсорной коре с использованием трансгенных мышей thy1-GCaMP6s. J. Vis. Exp. (2019).

Это видео демонстрирует запись нейронной активности мозга через оптическое окно у трансгенных мышей. Мыши экспрессируют флуоресцентный белок, который позволяет обнаруживать нейронную активность. Небольшая часть черепа осторожно удаляется для установки оптического окна, а затем череп покрывается черным цементом, чтобы блокировать свет перед визуализацией.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Подготовка животного к визуализации

1. Поместите в операционную область стерильную марлю, ватные палочки и автоклавные хирургические инструменты. Включите стерилизатор микрошариков для межоперационной стерилизации хирургических инструментов.
2. Обезболивание мышей (самцов или самок, 1,5–2,5 месяца, 20–25 г) путем внутрибрюшинного введения (в/в) смеси кетамина (17,2 мг/мл), ксилазина (0,475 мг/мл) и ацепромазина (0,238 мг/мл) (6 мкл/г массы тела). Подожд....

Результаты

Рисунок 1. Создание двусторонних окон на черепе. (А) На фотографическом изображении видны 2 краниальных оптических окна с каждой стороны черепа, расположенные над областью S1. (B) Большое увеличение прямоугольной области изображения (A), показывающей двусторонние оптические окна, обнажающие нижележащую твердую мозговую оболочку и кровеносные сосуды. Масштабная линейка = 680 мкм. (C) Обнаженный череп........

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
C57BL/6J-Tg(Thy1-GCaMP6s)GP4.3Dkim/J	джэксон	No 24275	Могут быть любые штаммы, продуцируемые генетически кодируемым нейронным индикатором и эффектором, экспрессирующим зеленый флуоресцентный индикатор кальция, GCaMP, в подмножествах возбуждающих нейронов в коре головного мозга.
В6. Cg-Tg(Thy1-EGFP)OJrs/GfngJ.	джэксон	7919	Могут быть любые штаммы, экспрессирующие EGFP в подмножествах нейронов в определенных популяциях коры головного мозга, обеспечивая яркое, жизнеспособное окрашивание по методу Гольджи.
Щипцы Dumont No5, стандартные, Dumoxel	Инструменты для точной науки	11251-30	Может быть любой бренд по выбору.
Щипцы Dumont No 5SF	Инструменты для точной науки	11252-00	Может быть любой бренд по выбору.
Стерилизатор микрошариков	Южная лабораторная посуда	В1201	Может быть любой бренд по выбору.
Адаптер для удержания головы Harishige SG-4N	Исследования Tritech	СГ-4Н	Может быть любой бренд по выбору.
Полный набор идеальных микродрелей	Гарвардский аппарат	72-6065 (Английский	Может быть любой бренд по выбору.
Заусенцы для микродрели	Инструменты для точной науки	19007-05	Может быть любой бренд по выбору.
Круглое защитное стекло, 3 мм	Гарвардские биологические науки	W4 64-0720	Может быть любой бренд по выбору.
Круглое защитное стекло, 5 мм	Гарвардские биологические науки	W4 64-0700	Может быть любой бренд по выбору.
Оптический клей Norland	Продукты Norland	7106	Может быть любой бренд по выбору.
Жидкий суперклей Loctite	В.Б. Мейсон	LOC1647358	Может быть любой бренд по выбору.
Набор цемента Grip, порошок и растворитель	Дентспли	675570 (Английский	Может быть любой бренд по выбору. Смешайте 5 частей белого порошка стоматологического цемента (Grip Cement) с одной частью черной темперной порошковой краски (для защиты от света; некоторые пользователи предпочитают соотношение 10:1).
Гелевая пена	Мур Медикал	2928	Может быть любой бренд по выбору.
Микроножницы для препарирования	Робоз	РС-5841	Может быть любой бренд по выбору.
Искусственная спинномозговая жидкость (АЧС)	- T	- T	ACSF содержит 125 мМ NaCl, 4,5 мМ KCl, 26 мМ NaHCO3, 1,25 мМ NaH2PO4, 2 мМ CaCl2, 1 мМ MgCl2 и 20 мМ глюкозы. Наполните ACSF кислородом (95% кислорода, 5% углекислого газа) и отрегулируйте pH до 7,4. Готовьте свежий раствор ACSF перед каждым экспериментом.

) гг. ) г.