$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Имплантация электродов VEP
- Обезболить животное внутрибрюшинной инъекцией кетамина (75 мг/кг) и медетомидина (0,5 мг/кг).
заметка: После индукции анестезии наблюдайте за рефлексами отмены (щипковая проба, роговичный и глазной рефлекс и т.д.) и их отсутствие как показание к началу хирургического вмешательства. Постоянно наблюдайте за животными на протяжении всей операции и вводите дополнительные обезболивающие препараты (10% от начальной дозы кетамина на одну добавку), если рефлексы присутствуют. В экспериментах используются взрослые крысы (>12 недель).
- Побрейте кожу в области операции. Положите животное на грелку (37 °C) для поддержания температуры тела во время операции. Подготовьте кожу с помощью местного применения повидон-йода. Наложите хирургическую драпировку. Применяйте местную офтальмологическую мазь для предотвращения сухости роговицы под общим наркозом. Поддерживайте асептическую асептику с помощью стерильных инструментов.
- Сделайте продольный разрез кожи по средней линии кожи головы. Очистите соединительную ткань, чтобы добиться хорошего обнажения черепа.
- Аккуратно просверлите небольшие отверстия для заусенцев вручную с помощью ручного микросверла на расстоянии 7 мм позади брегмы и на 3 мм сбоку от средней линии.
- Имплантат вкрутите винтовые электроды через череп в кору головного мозга (зона 17), проникая в кору головного мозга на глубину примерно 0,5 мм. Вживите винтовой электрод сравнения по средней линии на 3 мм ростраль к брегме. Нанесите стоматологический цемент для фиксации и фиксации винтов (не всегда требуется).
- Зашить кожу головы, нанести на кожу мазь с антибиотиком и дать животному восстановиться после анестезии на согревающей салфетке.
Примечание: В качестве альтернативы электроды можно оставить открытыми, чтобы не нужно было повторно открывать кожу при каждой записи. Сразу после прекращения операции, но до восстановления после анестезии, введите нестероидный противовоспалительный препарат (НПВП) (если он не был введен до операции) или опиоидный анальгетик. Постоянно наблюдайте за животными до тех пор, пока они полностью не восстановятся после приема анестетика и не станут амбулаторными.
- Подождите не менее 1 недели, чтобы животные восстановились после операции, прежде чем регистрировать VEP.
2. Запись VEP
- Обезболите животное и подготовьте шкуру по пунктам 1.1 и 1.2.<бр/>
Примечание: Для электрофизиологической регистрации можно использовать более низкую дозу анестетиков (кетамин 40 мг/кг и медетомидин 0,25 мг/кг).
- Поместите крысу в темную комнату и дайте ей адаптироваться к темноте в течение 5 - 30 минут. В некоторых случаях крысы могут быть адаптированы к темноте O/N для скотопических или к свету для фотопических записей VEP.
- Поддерживайте температуру тела на уровне 37 ± 0,5 °C с помощью системы гомеотермического одеяла с помощью зонда ректального термометра.
- Расширьте зрачки с помощью глазных капель с 1,0% тропикамидом. Откройте кожу над черепом, чтобы получить доступ к предварительно установленным на месте винтовым электродам.
- Подсоедините винт над контралатеральной зрительной корой стимулируемого глаза и референсный винт к усилителю. Вставьте игольчатый электрод в хвост как землю. Измеряйте и поддерживайте импеданс электрода ниже 5 кОм.
- Поместите мини-стимулятор Ганцфельда непосредственно на кожу вокруг век, чтобы обеспечить превосходную изоляцию глаз. Освещенность стимулятора должна быть предварительно откалибрована фотометром.
- Обеспечьте фотостимуляцию с помощью световых вспышек 100 раз с частотой 1 Гц с низкими и высокими настройками полосового фильтра 1 и 100 Гц соответственно. Частота дискретизации сигнала составляет 5 кГц.<бр/>
Примечание: Сигналы должны дискретизироваться с частотой не менее 250 - 300 Гц, чтобы гарантировать, что в течение каждого цикла будет собрано более двух выборок.
- Зашите кожу обратно и держите животных на согревающей подушке, чтобы восстановиться после анестезии. Запись может быть многократно записана на отдельных животных для отслеживания функциональных изменений в течение определенного периода времени.