Селективное манипулирование тета-осцилляциями в модели мыши

Аннотация

Источник: Bender, F. et al., Оптогенетическая синхронизация тета-колебаний гиппокампа у ведущих себя мышей. J. Vis. Exp (2018)

Это видео демонстрирует протокол модуляции тета-колебаний в генетически модифицированной модели мыши со светочувствительными ионными каналами в нейронах ГАМКергической медиальной перегородки. Доставляя световые импульсы в гиппокамп, протокол направлен на синхронизацию нейронной активности и генерацию тета-колебаний, которые записываются как потенциалы локального поля.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

PV-Cre самцов мышей-самцов в возрасте 10-25 недель. Мыши содержались в стандартных условиях в помещении для животных и содержались по циклу 12 свет/темнота.

1. Подготовка массивов вольфрамовых проводов для записи LFP

1. Приклейте одно оптическое волокно к массиву проводов так, чтобы кончик волокна находился на уровне самого короткого провода, а кончик волокна находился в непосредственной близости, но не касаясь вольфрамовых проводов. Держите угол наклона волокна как можно меньше, чтобы предотвратить повреждение тканей во время имплантации.

2. Оптогенетическая стимуляция и получение электрофизиологических данных

1. Проверьте светоотдачу от патч-корда. Оцените светоотдачу от наконечника волокна после подключения в зависимости от скорости передачи имплантируемого волокна. Убедитесь, что светоотдача от наконечника оптоволокна находится в диапазоне 5-15 мВт, чтобы обеспечить надежное увлечение.
2. Подключите предусилитель в верхней части сцены к хронически имплантируемому разъему. Подключите оптоволоконный патч-корд к хронически имплантированному волокну гиппокампа для экспериментов по оптогенетической стимуляции. В экспериментах по контрольной световой стимуляции оптическое волокно подключается к фиктивному наконечнику, подключенному к гарнитуре.
3. Поместите мышь в камеру записи.
4. Откройте программное обеспечение для управления генератором стимулов и сгенерируйте протокол стимуляции.
5. Выберите канал, который управляет DPSS-лазером с длиной волны 473 нм.
6. Откройте программное обеспечение системы записи. Нажмите на "ACQ" для получения и "REC" для записи. Подождите перед началом световой стимуляции, чтобы записать поведение базового уровня (например, 2 минуты для получения базовой скорости или 30 минут для извлечения полей базового уровня).
7. Откройте программу для управления генератором стимулов. Нажмите «Файл > открыть» и выберите нужный файл протокола. Нажмите «Загрузить и начать», чтобы начать световую стимуляцию.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Мыши PV-Cre	Лаборатория Джексона	В6; 129P2-Pvalbtm1(cre)Arbr/J
DPSS лазер 473 нм	Laserglow Technologies, Торонто, Онтарио, Канада	R471005FX	Серия LRS-0473
DPSS лазер 593 нм	Технологии лазерного свечения	R591005FX	Серия LRS-0594
MC_Stimulus II	Многоканальные системы, Ройтлинген, Германия	СТГ 4004
Вольфрамовая проволока	California Fine Wire Company, Гровер-Бич, Калифорния, США	CFW0010954	40 мкм, 99,95%
Головная сцена	Neuralynx, Бозмен, Монтана США	ХС-8	миниатюрные предусилители Headstage Unity Gain
светодиод	Невралинкс	HS-LED-Красный-омни-10В
МАТЛАБ	Mathworks, Натик, Массачусетс, США
MC_Stimulus программное обеспечение	Многоканальные, Системы
Многомодовое оптическое волокно	ThorLabs, Дахау, Германия	FG105LCA	0,22 NA, Low-OH, сердечник Ø105 μм, 400 - 2400 нм
Многомодовый оптоволоконный ответвитель	Торлабс	ФСМ50-50А-ФК	Соединитель 1x2 мм, соотношение 50:50, волокна GI 50 мкм, FC/PC