Методическая статья

Одновременное измерение внутриклеточного кальция и мембранного потенциала в эндотелии головного мозга мыши

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Хаким, М. А. и др. Одновременное измерение внутриклеточного кальция и мембранного потенциала в недавно изолированном и интактном эндотелии головного мозга мыши. J. Vis. Exp. (2019)

Видео демонстрирует одновременное измерение внутриклеточного уровня кальция и изменения мембранного потенциала в эндотелиальных клетках сегментов мозговой артерии мыши. Изолированная эндотелиальная трубка загружается флуоресцентным индикатором кальция и обрабатывается препаратом, который индуцирует внутриклеточное высвобождение кальция, что приводит к изменению мембранного потенциала. Флуоресценция индикатора позволяет измерять уровень кальция, а записывающий электрод вставляется в ячейку для измерения изменений мембранного потенциала.

Протокол

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные со сбором образцов, были выполнены в соответствии с рекомендациями института IRB.

1. Рассечение и изоляция мозговой артерии

ПРИМЕЧАНИЕ: Все процедуры вскрытия требуют увеличения образца (до 50x) с помощью стереомикроскопов и освещения, обеспечиваемого оптоволоконными источниками света. Для выполнения диссекционных процедур по выделению головного мозга и артерий используют заточенные диссекционные инструменты. Инструменты для микродиссекции для изоляции и очистки артерий включают заостренные щипцы с тонким наконечником и ножницы для рассечения в стиле Ваннас....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Рисунок 1: Изоляция мозговой артерии от мозга. (A) Изолированный мозг с интактными артериями (белая стрелка указывает на заднюю мозговую артерию) в растворе для рассечения. (B) Увеличенный вид задней мозговой артерии (белая стрелка; ~3x противПанель А). (C) Изолированные задние мозговые артерии, закрепленные штифтами из нержавеющей стали в ч.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
глюкозаSigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США)Г7021
NaClсигмаС7653
MgCl2сигмаМ2670
CaCl2сигма223506
ХЕПЕСсигмаН4034
KClсигмаП9541
НаОХсигмаС8045
СПСсигмаА2383
список совместимого оборудованияThermoFisher Scientific (Питтсбург, Пенсильвания, США)A466250
Коллагеназа (смесь типа H)сигмаС8051
ДитиоэритритолсигмаД8255
папаинсигмаП4762
ЭластазасигмаЕ7885
БСАсигмаА7906
Йодид пропидиясигмаП4170
ДмсосигмаД8418
Краситель Фура-2 АМInvitrogen, Карлсбад, Калифорния, СШАФ14185
Рециркуляционный охладитель (Isotemp 500LCU)ThermoFisher Scientific13874647
Камера суперплавления из оргстекла Warner Instruments, Камден, Коннектикут, СШАРК-27
Стеклянное покровное дно (2,4 × 5,0 см)ThermoFisher Scientific12-548-5М
Платформа из анодированного алюминия (диаметр: 7,8 см) Уорнер ИнструментсPM6 или PH6
Компактная алюминиевая сцена Сискию, Грантс-Пасс, Орегон, США8090П
микроманипуляторСискию МХ10
Стереомикроскопы Zeiss, штат Нью-Йорк, СШАStemi 2000 & 2000-C
Волоконно-оптические источники света Schott, Майнц, Германия и KL200, ZeissФостек 8375
Инвертированный микроскоп NikonNikon Instruments Inc, Мелвилл, штат Нью-Йорк, СШАЦ2
Объективы фазового контраста Компания Nikon Instruments Inc (Ph1 DL; 10X & 20X)
Флуоресцентные объективы Компания Nikon Instruments Inc20X (S-Fluor) и 40X (Plan Fluor)
Инвертированный микроскоп NikonКомпания Nikon Instruments IncЗатмение TS100
Контроллер микрошприцевого насоса (Micro4 ) World Precision Instruments (WPI), Сарасота, Флорида, СШАSYS-MICRO4
Виброизоляционный столТехническое производство, Пибоди, штат Массачусетс, США Микро-г
УсилителиMolecular Devices, Саннивейл, Калифорния, СШАAxoclamp 2B и Axoclamp 900A
Головные уборы Молекулярные приборыHS-2A и HS-9A
Генератор функций EZ Digital, Сеул, Южная КореяФГ-8002
Система сбора данныхMolecular Devices, Саннивейл, Калифорния, СШАDigidata 1550А
Звуковые базовые мониторыAmpol US LLC, Сарасота, Флорида, США БМ-А-ТМ
Цифровой запоминающий осциллографTektronix, Бивертон, Орегон, США TDS 2024B
Интерфейс флуоресцентной системы, дуговая лампа + источник питания, гиперпереключатель, ФЭУMolecular Devices, Саннивейл, Калифорния, СШАСистемы IonOptix
Регулятор температуры Уорнер ИнструментсTC-344B или C
Встроенный нагреватель Уорнер ИнструментсШ-27Б
Контроллер клапана Уорнер ИнструментсВК-6
Встроенный клапан регулирования расходаУорнер Инструментс ФР-50
Электронный съемник Sutter Instruments, Новато, Калифорния, США-97 или-1000
МикрокузницаNarishige, Ист-Мидоу, Нью-Йорк, США МФ-900
Трубки из боросиликатного стекла (растирание)World Precision Instruments (WPI), Сарасота, Флорида, США1В100-4
Трубки из боросиликатного стекла (штифты)Уорнер ИнструментсГ150Т-6
Трубки из боросиликатного стекла (острые электроды)Уорнер ИнструментсГК100Ф-10
Шприцевой фильтр (0,22 мкм) ThermoFisher Scientific722-2520 (Английский)
Стеклянная чашка Петри + уголь СильгардКонтрольно-измерительные приборы для живых систем, Сент-Олбанс-Сити, Вермонт, СШАДД-90-С-БЛК
Ножницы в стиле Vannas (3 мм и 9,5 мм)Мировые прецизионные приборы555640С, 14364
Ножницы с лезвиями 3 и 7 ммFine Science Tools (или FST), Фостер-Сити, Калифорния, СШАMoria MC52 и 15000-00
Заточенные щипцы с тонким наконечником ФСТДюмон #5 и Дюмон #55

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Fura 2

Похожие статьи