Тестирование функции сенсорного нерва на модели мыши, подвергшейся хирургической денервации

Abstract

Источник: Peterson, S. C. et al., Кожная хирургическая денервация: метод проверки потребности в нервах на мышиных моделях кожных заболеваний. J. Vis. Exp. (2016)

Это видео демонстрирует тестирование сенсорной функции нерва в модели мыши путем хирургической денервации одной стороны и оставления другой в качестве контрольной. Реакция на механическую стимуляцию подтверждает роль сенсорных нервов.

Protocol

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Хирургическая денервация

1. Раствор анестетика вводят внутрибрюшинно в дозе 200 мкл на 20 г массы тела мыши. Убедитесь, что животное достигло нужного уровня седации с помощью анализа на пальцах ног, и подтвердите, что частота сердечных сокращений и дыхания в норме (примерно 600 ударов и 160 вдохов в минуту соответственно).
2. Подготовьте операционную область кожи спины с помощью бетадина и спиртовых салфеток и накройте животное стерильной хирургической простыней (в демонстрационных целях стерильная простыня была опущена для улучшения видимости). Согревайте животное с помощью грелки во время работы в асептической хирургической зоне.
3. Сделайте разрез с помощью стерильного скальпеля #11 вдоль спинной средней линии от основания шеи примерно на 0,5 см выше хвоста.
4. С помощью тупых щипцов аккуратно отразите кожу с левой стороны от бока, чтобы визуализировать подлежащую ткань от лопаточных жировых пакетов возле шеи до чуть выше задней конечности.
   заметка: Дорсальные кожные нервы выглядят как белые нити, которые проходят каудально через полупрозрачную фасцию стенки туловища, прежде чем сделать резкие изгибы и войти в рыхлую соединительную ткань под кожей (рис. 1).
5. С помощью ультратонких щипцов под рассекающим световым микроскопом удаляют нервы исключительно с левой стороны животного, расположенные на анатомических участках Т3-12, путем выщипывания из мест изгиба сегментов у стенки туловища к местам их входа в кожу (рисунок 1).
   1. Ориентируйте щипцы вертикально и удаляйте нервы, захватывая их примерно на 0,5 см ниже мест их изгиба и вытягивая вверх, в результате чего нерв растягивается и отделяется от окружающих тканей (Рисунок 1C-E). Будьте осторожны, чтобы не допустить разрыва соседних кровеносных сосудов.
   2. Продолжайте до тех пор, пока не будут удалены все нервы, идущие от стенки туловища к коже. Не нарушайте нервы в плотной фасции стенки ствола. Поддерживайте влажность тканей на протяжении всей процедуры, периодически нанося капли стерильного 0,9% физиологического раствора.
   3. В качестве альтернативы можно удалить нервы, обхватив их проксимальные концы у стенки туловища щипцами и отрезав их тонкими ножницами. После этого разрежьте дистальные концы рядом с кожей (рисунки 1F-H). Наконец, удалите промежуточные нервные сегменты (рисунок 1I).
6. Удалите все нервы с кожного лоскута, открытого в Шаге 1.4. Эти волокна включают в себя дистальные ветви тыльной стороны кожных нервов и выглядят как белые ветвящиеся нити, расположенные спорадически в соединительной ткани на дермальной стороне кожного лоскута (рисунки 1J-K).
   1. Чтобы удалить эти тонкие ветви, расположите тонкие щипцы примерно параллельно дермальной поверхности, захватите нервы и вытяните вверх, чтобы не нарушить кровеносные сосуды и не проколоть кожу. Продолжайте до тех пор, пока не будут удалены все видимые нервы.
7. Используя тупое рассечение, отразите кожу с правой стороны дорсального разреза по средней линии, но не удаляйте нервы. Это будет служить контралатеральным фиктивным управлением.
8. Шов вдоль дорсальной средней линии по простой прерывистой схеме закрыть разрез с помощью 6-0 нейлоновых швов, в простом прерывистом узоре, расположенном на расстоянии примерно 3 мм друг от друга.
9. Не возвращайте мышей, перенесших операцию, в одну клетку с другими животными до полного выздоровления.
10. Наблюдайте за животными сразу после операции, пока они не придут в сознание, а также ежедневно, пока хирургическая область не заживет, обычно в течение 1 недели. Используйте анальгетики в соответствии с рекомендациями по уходу за животными и используйте их, если у мышей проявляются признаки боли или недомогания. Снимите швы в течение 7-10 дней после операции. заметка: При необходимости приготовьте обезболивающий раствор, разведя карпрофен (50 мг/мл исходного раствора) в соотношении 1:100 в стерильной воде. Введите раствор подкожно между лопатками в районе загривка в дозе 200 мл на 20 г массы тела (5 мг/кг массы тела мыши).
11. Чтобы функционально оценить стабильную денервацию в течение нескольких недель после операции, удалите волосы с тыльной стороны кожи с помощью электрической машинки для стрижки.
12. Осторожно уколите денервированный участок кожи иглой для подкожных инъекций и обратите внимание, реагирует ли животное, как правило, вздрагиванием или поворотом головы. Если участок кожи был стабильно денервирован, животное будет проявлять незначительную реакцию или вообще не будет проявлять.

Results

Рисунок 1. Два подхода для денервации спинной кожи. (А) Мультяшная диаграмма иннервированной кожи мыши. Красными пунктирными линиями обозначено одно иссечение, сделанное вдоль дорсальной средней линии, чтобы обнажить нижележащую мускулатуру на стенке туловища (фиолетовый), а также дерму (серый, звездочка) под отраженной кожей. Дорсальные кожные нервы, идущие каудально, кажутся «изгибающимися», ког...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Салфетки для приготовления алкоголя	ПДИ	В339
AnaSed (Ксилазин)	Ллойд	НАДА 139-236
Подушечки для приготовления бетадина	Медлайн	MDS093917
Карпрофен (Римадил)	Зоетис
Аккумуляторная машинка для стрижки	Валь	Триммер модели 8900
6-0 нейлоновые шовные материалы	ДемеТЕХ	NL166012F4P
Ультратонкие щипцы	Дюмон	0103-5-ПО