Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных.
1. Запись синаптических откликов в камере для погружения
ПРИМЕЧАНИЕ: Смотрите таблицу материалов.
- Предварительно подогрейте раствор aCSF на водяной бане примерно до 28-30 °C (это предотвратит образование пузырьков в камере записи).
- Запустите систему рециркуляции (4-5 мл/мин) и активируйте встроенный нагреватель для балансировки системы не менее чем на 1 ч.
- Предварительно замочите небольшой кусочек бумаги для чистки объектива и капроновую сетку, закрепленную на U-образной платиновой проволоке, в камере для погружения на несколько минут (рис. 1).
- Снимите U-образную платиновую проволоку.
- Выключите переработку и положите ломтик на бумагу для чистки объектива.
- Немедленно поместите сетку для удержания среза поверх среза, включите насос и дайте срезу уравновеситься в течение 30 минут, не погружая объектив в аCSF.
- Заполните боросиликатную микропипетку (т.е. записывающий электрод) aCSF (сопротивление наконечника: 1-2 МОм, заполнено на 1/3 aCSF) и установите ее в держатель пипетки.
- Поместите испытанный вольфрамовый электрод с эпоксидной изоляцией в держатель манипулятора, а провода сравнения — в камеру среза.
- Добавьте второй электрод сравнения в камеру и подключите его к контрольному гнезду головного столика записывающего электрода (рис. 1A).
- В программном обеспечении для управления усилителем нажмите на поле «режим нулевого зажима» и продолжите, дважды кликнув по полю «список выходного усиления». Выберите коэффициент усиления «100», дважды щелкните «Список фильтров высоких частот (по Бесселю)», выберите «0,1 Гц» и дважды щелкните «Список фильтров низких частот (AC)», чтобы выбрать «3 кГц».
- В программном обеспечении для записи нажмите на кнопку "Приобрести | Open Protocol (Открытый протокол)." Выберите протокол, который имеет настройки, позволяющие выполнять эпизодическую стимуляцию и оцифровку усиленных потенциалов на частоте 10-20 кГц в течение 50-100 мс, и который автоматически запускает изолятор стимулов через 10 мс после начала эпизодической записи.
- Разместите электроды стимуляции и записи на одной линии и параллельно пирамидальному слою, например, (Рисунок 1B и Рисунок 2).
- Нажмите "Приобрести | Редактировать протокол» и выберите вкладку «триггер» (во всплывающем окне). Нажмите на поле «Источник триггера» и выберите «пробел» в качестве источника триггера. Нажмите кнопку «ОК». Нажмите кнопку «Запись», чтобы начать захват и обратите внимание на всплывающее окно с триггерной кнопкой.
- В программном обеспечении изолятора стимулов нажмите на поле «контроль напряжения» и введите «0». Нажмите кнопку «скачать». Нажмите на окно «Программа для записи» и нажмите пробел. Повторите этот цикл, последовательно вводя значения от 1 до 8, например, с шагом 1 мВ в поле «контроль напряжения».
- Соотнесите силу стимуляции со значениями наклона fEPSP и определите необходимую силу стимуляции для получения 40% от максимума наклона fEPSP. Нажмите на «поле управления напряжением» и введите определенное значение. Нажмите кнопку "скачать".
заметка: Изолятор стимулов используется для подачи кратковременных импульсов напряжения или тока на ткани мозга. Двухфазные импульсы могут иметь 100 мкс на фазу.
- В программном обеспечении для записи нажмите кнопку «Стоп», а затем меню «Приобретение». Нажмите «Редактировать протокол» и выберите вкладку «Триггер» во всплывающем окне. Нажмите на поле источника триггера и выберите «внутренний таймер» в качестве источника триггера. Нажмите кнопку «ОК». Например, нажмите кнопку записи, которая запускает автоматическую запись потенциалов поля каждые 30 с. Нажмите кнопку «стоп» через 30-60 минут.
- Нажмите на меню «Получить», нажмите на «Открыть протокол», выберите нужный протокол индукции синаптической пластичности и нажмите кнопку «ОК». Нажмите кнопку «запись», чтобы автоматически активировать высокочастотную стимуляцию и запись. Нажмите кнопку "стоп".
заметка: В случае исследований, связанных с синаптической пластичностью, примените одну из стандартных индукционных парадигм для долгосрочного потенцирования или долгосрочной депрессии после длительной исходной записи. Репрезентативные примеры результирующей модуляции синаптической передачи изображены на рисунках 4 и 5.
- В программном обеспечении для записи нажмите «Приобрести | Открыть протокол» и выбрать тот же протокол, что и в шаге 4.12. Нажмите кнопку "ОК", а затем нажмите "запись." Продолжайте автоматически запускать поле потенциальных записей, например, в течение 2-4 часов. Нажмите кнопку «стоп», чтобы прервать запись.
- В случае фармацевтических исследований применяйте соединение непосредственно в резервуаре с ФКБ, если требуется постоянное введение соединения (Рисунок 3).
