Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
860 просмотров
⸱
8 июля 2025 г.
Источник: Grimm, C., et al. Запись патч-зажима для электрофизиологического определения ионной селективности в каналродопсинах. J. Vis. Exp. (2017)
В этом видео эмбриональные культуры клеток почек, экспрессирующие светозависимые белки ионных каналов, слитые с флуоресцентным репортером, демонстрируют влияние света на движение ионов. Патч-зажим для целых клеток используется для контроля движения ионов.
1. Настройка перед записью
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Элементы HEK293 | Сигма Олдрич | 85120602 | Эмбриональные клетки почек человека |
| Сетчатки | Сигма Олдрич | Р2500 | Полностью транс-сетчатка |
| FuGENE HD | Компания Promega | Е2312 | Реагент для трансфекции |
| DMEM | Биохром | ФГ 0445 | Модифицированный Eagle Medium от Dulbecco |
| агароза | Рот | No 3810 | Агаровые мосты |
| CaCl2 | Рот | No 5239 | CaCl2 2H2O |
| CsCl | Биомол | 2452 | |
| ЭГТА | Рот | No 3054 | |
| ФБС | Биохром | С0615 | Культура клеток |
| глюкоза | Рот | ХН06 | D(+)-глюкоза |
| KCl | Рот | Номер 6781 | |
| MgCl2 | Рот | 2189 | MgCl2 6H2O |
| NaCl | Рот | No 3957 | |
| НМГ | Сигма Олдрич | М2004 | N-метил-D-глюкамин |
| Na-аспартат | Сигма Олдрич | А6683 | L-аспарагиновая кислота моногидрат натриевой соли |
| лимонная кислота | Рот | No 6490 | |
| ВозрастI | ThermoFischerScientific | ЭР1462 | Фермент рестрикции |
| XhoI | ThermoFischerScientific | ЭР0695 | Фермент рестрикции |
| NheI | ThermoFischerScientific | ЭР0975 | Фермент рестрикции |
| XL1Blue E.coli/ | Agilent Technologies | 200249 | Химиокомпетентная кишечная палочка |
| канамицин | Рот | Т832 | |
| Отварная среда лизогения | Рот | Х964 | |
| Агар-Агар | Рот | Номер 6494 | Агаровые пластины |
| Набор для очистки плазмид | Марчери-Нагель | 740727.25 (Английский | |
| Пенисилин/стрептомицин | Биохром | А 2213 | Культура клеток |
| Гидробромид поли-D-лизина | Сигма Олдрич | П6407-5МГ | Защитное покрытие |
| Микрокузница | Изготовление на заказ | Противопожарная полировка | |
| Серологические пипетки | ТЭС | Разные размеры | |
| Чистая скамейка | Коджаир | Биоволшебник SL130 | |
| мешалка | ИКА | РКИ классическая | |
| Серебряная проволока | Научная продукция | АГ-Т25; АГ-Т10 | Электроды, 0,64 мм (ванна); 0,25 мм (электрод) |
| pH-метр | Безликовые | 765 Calimetric | |
| Осмометр | Вогель | ОМ 815 | |
| микроскоп | Карл Цейсс | ИД03 | Противопожарная полировка |
| CO2-инкубатор | сноповязалка | КБ150 | |
| Чашки для клеточных культур | ТЭС | 93040 | Внутренний диаметр 34 мм |
| Чехлы крышки | Рот | П232 | Диаметр 15 мм |
| термометр | Rössel Messtechnik | МТМ12 | |
| Светоделитель | Цветность | 21011 | Коробка передач 90/10 |
| Держатель для пипеток | Научные инструменты ALA | ППХ-1П-АКСУ-0-1,5 | |
| Головная сцена | Молекулярные приборы | CV203BU | |
| усилитель | Молекулярные приборы | АксоПатч200В | |
| Дигитайзер | Молекулярные приборы | ДиджиДата1400 | Цифровой аналоговый преобразователь |
| Источник света | ТИЛЛ Фотоника | Полихром V | Установлена на полную интенсивность 540 нм |
| микроскоп | Карл Цейсс | Axiovert 100 | |
| ставень | Винсент Ассошиэйтс | ВС25 | |
| Отвертка затвора | Винсент Ассошиэйтс | ВКМ-Д1 | |
| Стеклянные капиляррии | Уорнер Инструментс | Г150Ф-3 | Боресиликатные капилляры с полированными концами наружным диаметром 1,5 мм ID 0,86 мм |
| Съемник микропипеток | Инструменты Саттера | П1000 | |
| Ручка для ванны | Lorenz Messgerätebau | МПКУ | |
| Трехполосный фильтр | Цветность | 69008 | Флуоресцентный фильтр ECFP/EYFP/mCherry |
| ПЗС-камера | Ватек | ВАТ-221СКДД | |
| Оптометр | Гигагерцовая оптика | П9710 | Измерение интенсивности света |
| объективный | Карл Цейсс | 421462-9900-000 | W Plan-Apochromat 40X/1.0 DIC |
| микроманипулятор | Scientifica | ПатчСтар | |
| Записывающая камера | Изготовление на заказ | ||
| электропитание | Мэнсон | НС-3202 | Предотвращение электрических помех от встроенного блока питания микроскопа |
| Виброизолированный стол | Ньюпорт | М-ВВ-3636-ОПТ-01 | |
| Клетка Фарадея | Стол на заказ или любой коммерческий стол | ||
| Шланги | Любая коммерческая деятельность, например, Рот | Различные размеры и материалы для работы в ванне и приложения давления пипетки; агаровые мосты | |
| Линейный встряхиватель | Инструменты Sunlab | СУ 1000 | |
| Калькулятор потенциала жидкостного перехода | Molecular Devices или непосредственно у Питера Х. Барри | Программа входит в состав программного обеспечения Clampex или может быть получена в p.barry@unsw.edu.au | |
| Программное обеспечение для сбора данных | Молекулярные приборы | Зажим 10.X | |
| Программное обеспечение для оценки данных | Молекулярные приборы | Зажимная посадка 10.X | |
| ПсАКР1 | GenBank или Addgene | KF992074.1 или плазмид Addgene #85465 | Кодирование генов PsACR1 |
| Гайд по усилителям | Молекулярные приборы | Путеводитель по Axon |
