Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Выделение белков клеточной поверхности и внутриклеточных белков из культуры астроцитов

849 просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Tham, D. K. L., et al. Определение экспрессии на клеточной поверхности и эндоцитарной скорости белков в первичных культурах астроцитов с помощью биотинилирования. J. Vis. Exp. (2017).

Это видео демонстрирует выделение белков клеточной поверхности и внутриклеточных белков из культуры астроцитов. Культуру астроцитов помещают на лед для ингибирования эндоцитоза, а затем белки клеточной поверхности мечают реагентом для биотинилирования. Клетки лизируются для высвобождения биотинилированных белков клеточной поверхности и небиотинилированных внутриклеточных белков. Наконец, гранулы, покрытые стрептавидином, используются для отделения биотинилированных белков клеточной поверхности от внутриклеточных белков.

Протокол

1. Определение относительной экспрессии белка клеточной поверхности в астроцитах методом биотинилирования

ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь мы иллюстрируем применение этого метода биотинилирования для изучения влияния молекулы внеклеточного матрикса ламинина на локализацию на клеточной поверхности водопроницаемого канала аквапорин-4 (AQP4). Специализированные материалы, необходимые для этого анализа, включают сульфо-NHS-LC-биотин (сульфосукцинимидил 6-(биотинамидо) гексаноат) и стрептавидин-агарозную смолу (см. Таблицу материалов).

  1. Используя этот метод, подготовьте культуры кортикальных астроц....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Хлорид аммония (NH4Cl)Научный центр ФишераА661-500
Бромфенол синийБио-Рад#1610404
Полный коктейль ингибиторов протеазыСигма-Олдрич11697498001
Динатрия этилендиаминтетраацетата дигидрат (ЭДТА)Био-Рад#1610729
Дитиотреитол (DTT)Био-Рад#1610611
EZ-Link Sulfo-NHS-LC-биотинThermo Fisher Scientific#21335
глицеринНаучный центр ФишераБП229-1
глицинСигма-ОлдричГ8898
Ламинин из базальной мембраны саркомы мышей Engelbreth-Holm-SwarmСигма-ОлдричЛ2020
Фосфатный буферный растворGibco/Thermo Fisher Scientific10010-023
Хлорид натрия (NaCl)Научный центр ФишераС271-500Оттаять на льду.
Додецилсульфат натрия (SDS)Сигма-Олдрич862010
Гидроксид натрия (NaOH)Научный центр ФишераС318-100
Стрептавидин агарозная смолаThermo Fisher Scientific#20347
Тритон Х-100Научный центр ФишераБП151-500
Сталь

Больше статей

белки клеточной поверхностиреагент для биотинилированиястрептавидин-связывающие микросферыизоляция белковингибирование эндоцитозализирующий буферцентрифугированиеразделение белков