Нейропатология

Чтобы обнаружить атрофию мозга, начните со слайдов, содержащих депарафинизированные участки мозга нейродегенеративных мышей в разном возрасте.

Чтобы визуализировать эти НЧ, возьмите депарафинизированный, неподвижный срез человеческого мозга.

Добавьте воду двойной дистилляции, чтобы промыть секции.

Обработайте ткани тетраоксидом осмия для стабилизации клеточных структур, в том числе липофусцином.

Гомогенизируйте ткань для высвобождения белков в буфер. Ингибиторы протеазы блокируют активность протеазы, предотвращая деградацию белка.

Добавьте загрузочный буфер, содержащий моющее средство, восстановитель и краситель для слежения.

Инкубируйте с протеолитическим ферментом, чтобы переварить нормальные прионы, оставляя устойчивые агрегаты нетронутыми.

Инкубировать с раствором перекиси водорода для ингибирования эндогенных пероксидаз и предотвращения неспецифического окрашивания.

Эти участки содержат нейрофибриллярные клубки — аномальные агрегаты тау-белка, обнаруженные в нейронах гиппокампа.

Чтобы визуализировать сульфат гепарана, начните с пораженного участка ткани гиппокампа человека, содержащего амилоидные бляшки.

Центрифугируйте образец для гранулирования клеточного мусора и соберите надосадочную жидкость.

Этот протокол описывает экстракцию белков из нейрональных раковых клеток. Клетки промываются буфером и лизируются путем ферментативного и механического разрушения. Экстрагированный богатый белком надосадочный садок собирают после центрифугирования.

Это видео демонстрирует процедуру флуоресцентного окрашивания кортикальных нейронов крыс для микроскопии. Он нацелен на F-актин и дендритные белки для анализа структурной целостности и расчета плотности F-актина, что имеет решающее значение для изучения функции и здоровья нейронов.

Это видео демонстрирует протокол выделения амилоидных фибрилл из экстракта ткани мозга мыши с использованием центрифугирования градиента плотности и расщепления неамилоидных белков.

В этом видео описывается создание модели повреждения нейронов с использованием активных форм кислорода (АФК) в первичных гранулярных нейронах мозжечка. В нем подробно описан процесс индуцирования окислительного стресса путем добавления высоких концентраций перекиси водорода. Воздействие АФК вызывает разрывы нитей ДНК и геномную нестабильность. Кроме того, окисление клеточных белков ухудшает их функции, в то время как перекисное окисление липидов нарушает целостность мембраны. Этот каскад...

Это видео демонстрирует метод оценки нейротоксических эффектов наночастиц с помощью микроглии. В нем описаны этапы активации микроглии наночастицами, фильтрации кондиционированных сред для выделения провоспалительных цитокинов, полученных из микроглии, и тестирования токсичности нейронов гипоталамуса с помощью кондиционированной среды.

Видео демонстрирует индуцирование нейродегенерации в сегментарных нервах личинки дрозофилы через механическую травму. Вентральная кутикула личинок, находящихся под наркозом, защемляется с помощью щипцов, чтобы нанести травму сегментарным нервам. Поврежденные личинки поддерживаются пищей, что позволяет травме вызвать дегенерацию двигательных нейронов в нервах, вызывая нарушение их нервно-мышечных соединений (NMJ).

Это видео демонстрирует процедуру создания крысиной модели болезни Паркинсона путем введения нейротоксина 6-гидроксидофамина (6-OHDA) в мозг. Инфузия нейротоксина в медиальный пучок переднего мозга (MFB) целенаправленно нацелена на дофаминергические нейроны, отвечающие за моторный контроль, что приводит к их разрушению и репликации симптомов болезни Паркинсона.

В этом видео демонстрируется поэтапный протокол для эмбриональных стволовых клеток человека в нейральные органоиды. Метод включает в себя индуцирование формирования нейронной розетки с последующим контролируемым созреванием и окончательным культивированием на гидрофобной мембране для получения полностью развитых нейронных органоидов.

Это видео демонстрирует дифференцировку человеческих эмбриональных стволовых клеток (hESCs) в дофаминергические нейроны, чтобы предоставить модель для изучения болезни Паркинсона. ЭСК культивируют в среде нейронной индукции в микролуночной пластине для формирования трехмерных нейросфер. Затем их культивируют в среде нейронной индукции, чтобы способствовать дифференцировке в дофаминергические нейроны-предшественники. Окончательное созревание нейронов происходит в культуральной вставке в условиях...

Это видео демонстрирует in vitro оценку колбочки роста нейронов агрегатами амилоид-β (Aβ). Обработка нейронов агрегатами Aβ вызывает дестабилизацию цитоскелета, что приводит к коллапсу конусов роста на кончиках аксонов. Обработанные клетки сравнивают с контрольными клетками для оценки степени коллапса конуса роста.

Видео демонстрирует процедуру подготовки срезов кортикального мозга человека у пациентов с болезнью Альцгеймера для анализа отложения бета-амилоидных (Aβ) пептидов с использованием матричной лазерной десорбции/ионизационной масс-спектрометрии (MALDI-IMS). Этапы включают подготовку предметных стекол, обработку тканей для усиления ионизации и анализ пространственного распределения бета-амилоидных пептидов.

Это видео демонстрирует иммуноокрашивание нейронов, обработанных агрегатами альфа-синуклеина (αS). Сначала нейроны обрабатываются αS-агрегатами. Затем они фиксируются, проникают и обрабатываются блокирующим раствором. Добавляются первичные антитела, за которыми следуют флуоресцентно меченные вторичные антитела и ядерный краситель. Затем образец монтируется и рассматривается под микроскопом.

Это видео демонстрирует процедуру индуцирования дегенерации сетчатки у взрослых рыбок данио-рерио с помощью лазерной травмы. Лазер нацелен на фоторецепторные клетки сетчатки, вызывая гибель клеток и дегенеративный процесс. Это повреждение активирует клетки глии Мюллера (MG), что приводит к их дедифференцировке в предшественники стволовых клеток, которые способствуют регенерации сетчатки.

Это видео демонстрирует процедуру введения мономерных амилоидных пептидов в передний мозг взрослых рыбок данио-рерио для создания амилоидной токсичности, имитируя повреждение нейронов, наблюдаемое при болезни...

Это видео демонстрирует протокол измерения активации рецептора запаха в трансфицированных клетках с использованием биосенсора циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) и обнаружения люминесценции. Метод применяется для изучения рецептор-лигандных взаимодействий и сигнальных путей в обонятельных нейронах.

Это видео демонстрирует процедуру инъекции бета-амилоидных пептидов, хлорида алюминия и нейровоспалительного фактора роста, которые в совокупности способствуют образованию токсичных амилоидных бляшек в области гиппокампа. Это вызывает ухудшение памяти у крысы, характерное для болезни Альцгеймера.

Это видео демонстрирует точное стереотаксическое вливание бета-амилоида в зубчатую извилину для создания мышиной модели болезни Альцгеймера. Точное определение координат и контролируемая доставка бета-амилоидных белков приводят к деградации нейронов, нарушая обработку памяти и способствуя развитию болезни Альцгеймера.

Это видео демонстрирует инъекцию альфа-синуклеиновых фибрилл мыши, чтобы вызвать нейровоспаление. Фибриллы вводятся внутрибрюшинно трансгенной мыши, экспрессирующей мутировавшие белки альфа-синуклеина. Достигая центральной нервной системы, фибриллы проникают в нейроны и индуцируют агрегацию мутировавших белков. Агрегаты распространяются на соседние нейроны, микроглию и астроциты. Распознавание агрегатов запускает микроглию, которая вызывает нейровоспаление, повреждая нейроны.

Это видео демонстрирует процедуру визуализации in vivo C. elegans, экспрессирующих прионоподобные белки, помеченные красным флуоресцентным белком. Протокол включает в себя иммобилизацию нематод на агарозной прокладке для покадровой конфокальной микроскопии, выявляющей агрегацию белков и транспорт внутри и между клетками. Этот метод имеет решающее значение для изучения агрегации белков, связанной с нейродегенеративными заболеваниями.

Это видео демонстрирует процесс введения вирусного вектора в крысу substantia nigra для моделирования болезни Паркинсона. В нем описаны этапы подготовки крысы, микроинъекции вирусного вектора в черную субстанцию и процедура восстановления.

Это видео объясняет процесс выделения и обогащения нерастворимых в моющих средствах белковых агрегатов из замороженной посмертной ткани человеческого мозга. В нем демонстрируются ключевые этапы, включая гомогенизацию, обработку моющим средством, ультразвуковую обработку и ультрацентрифугирование для отделения и очистки нерастворимых агрегатов. Заключительный этап включает в себя солюбилизацию агрегатов в буфере мочевины для дальнейшего анализа.

Это видео демонстрирует визуализацию и количественное определение белковых агрегатов в генетически модифицированном мозге дрозофилы. Перед установкой мозги фиксируются, промываются и обрабатываются антивыцветающим средством. Изображения получают с помощью конфокального микроскопа и количественно оценивают для наблюдения за передачей мутантных белковых агрегатов.

Это видео демонстрирует протокол исследования совместной локализации орексина и каннабиноидных рецепторов в нормальной и индуцированной диетой ожирении (DIO) в ткани мозга взрослых данио-рерио с использованием иммунофлуоресценции.

В этом видео демонстрируется процесс количественного определения накопления альфа-синуклеина в эмбриональных дофаминовых нейронах мыши, предварительно обработанных предварительно сформированными фибриллами альфа-синуклеина. В нем описаны этапы фиксации, окрашивания и количественного определения дофаминовых нейронов, содержащих агрегаты альфа-синуклеина, с помощью иммунофлуоресценции.

Это видео демонстрирует, как измерить активность протеасом в различных субклеточных компартментах латерального миндалевидного тела из обусловленного страхом и контрольного мозга крыс с помощью анализа флуорогенных пептидов. Протеасома расщепляет субстрат флуорогенных пептидов, высвобождая флуоресцентные молекулы, которые количественно оцениваются с помощью планшетного ридера для оценки активности протеасом в ядерной и синаптической белковых фракциях. Повышенная ядерная активность предполагает...

Это видео демонстрирует процесс индуцирования дискинезии, вызванной леводопой, в модели крысы с болезнью Паркинсона путем введения леводопы вместе с ингибитором дофаминовой конверсии. Повторные инъекции чрезмерно стимулируют нейроны головного мозга, что приводит к двигательной дисфункции.

В этом видео демонстрируется индукция орофациальной нейропатической боли у крысы путем перевязки инфраорбитального нерва. Это приводит к повреждению нервов и воспалению, вызывая аномальную болевую сигнализацию и имитируя хронические болевые состояния, которые могут быть использованы для изучения анализа орофациальной боли.

В этом видео демонстрируется метод обнаружения стареющих нейронов в корковых органоидных отделах путем окрашивания на активность бета-галактозидазы, которая повышена в стареющих клетках. Фермент расщепляет субстрат для получения синего продукта, за которым следует микроскопическое наблюдение за окрашенными нейронами.

В этом видео демонстрируется создание мышиной модели фокальной демиелинизации с использованием двухточечной инъекции лизофосфатидилхолина (ЛПК). Обнажается череп мыши, находящейся под наркозом. Определяются координаты закачки, и просверливается отверстие для обеспечения возможности закачки LPC на целевых участках. LPC вызывает фокальную демиелинизацию нейронов через воспаление, в то время как двухточечная инъекция обеспечивает его устойчивость.

В этом видео демонстрируется процесс визуализации заполненного биоцитином интернейрона в гиппокампе крысы, подчеркивая его нейрохимическую идентичность с помощью специфических антител и флуоресцентной микроскопии.

В этом видео показано иммуногистохимическое окрашивание белка S-100 в срезах ректальной аспирационной биопсии. Полученные антигеном участки блокируют и обрабатывают первичными, а затем вторичными антителами против S-100, маркера болезни Гиршпрунга. Хромогенный субстрат добавляется для окрашивания клеток-мишеней. Образцы обезвоживаются и монтируются перед визуализацией под микроскопом.

В этом видео демонстрируется метод индуцирования демиелинизации в нейронах спинного мозга мышей с помощью инъекций лизолецитина с последующей ремиелинизацией путем миграции и дифференцировки клеток-предшественников олигодендроцитов. Процесс ухудшает, а затем постепенно восстанавливает передачу нейронного сигнала.

В этом видео демонстрируется процесс трансдукции нейронных клеток человека лентивирусом, кодирующим мутантный человеческий тау-белок, помеченный желтым флуоресцентным белком (YFP), для изучения агрегации белков. В нем описаны этапы от проникновения вируса к экспрессии мутантного тау, кульминацией которых является образование видимых цитоплазматических агрегатов тау в нейронах.

В этом видео демонстрируется мечение нейрональных клеток антителами к комплексам митохондриальной дыхательной цепи, белку, ассоциированному с митохондриальной ДНК, и белку внешней мембраны митохондриальной мембраны с последующей проточной цитометрией для количественной оценки их уровней.

В этом видео показана процедура измерения активности γ-секретазы в генетически модифицированных клетках человека с помощью тетрациклин-индуцируемой системы. Процесс включает в себя индуцирование экспрессии гена APP с помощью тетрациклина, генерацию пептидов β амилоида и активацию продукции люциферазы. Затем измеряют биолюминесценцию, возникающую в результате реакции люцифераза-субстрат, отражающую активность γ-секретазы.

В этом протоколе описывается использование иммуногистохимии для идентификации областей locus coeruleus в срезах мозга мыши. Нацеливаясь на дофамин β гидроксилазу с помощью антител, меченных зелеными флуорофорами, нейроны, продуцирующие норадреналин, визуализируются под микроскопом как зеленая флуоресценция.

Видео демонстрирует процесс использования микродиализного зонда для сбора внеклеточных белков из интерстициальной жидкости (ISF) мозга мыши. Микродиализный зонд, оснащенный высокомолекулярной отсечной полупроницаемой мембраной, вводится в мозг мыши, находящейся под наркозом, с помощью имплантированной направляющей канюли. Зонд, подключенный к насосам, позволяет физиологическому буферу перфузировать мозговую ткань и смешиваться с ISF. Белки в ISF диффундируют через полупроницаемую мембрану и...

В этом видео демонстрируется метод индуцирования хронического стресса у мышей с помощью повторной иммобилизации, что приводит к высвобождению кортикостерона и снижению активности глутаматных рецепторов в нейронах, что приводит к депрессивному поведению.

В этом видео показана процедура приготовления и лечения гемисрезов мозга крыс нейротоксическим пептидом для имитации нейродегенерации. Протокол позволяет анализировать нейродегенеративные события путем прямого сравнения контрольных и обработанных срезов в одной анатомической плоскости.

В этом видео показано использование трансфицированных ганглиозных клеток дорсального корешка для изучения высвобождения нейротрансмиттеров путем стимуляции их агонистом нейропептидных рецепторов.

В данном видео демонстрируется иммуногистохимическое окрашивание холинергических волокон в базальном ядре области Мейнерта участков мозга мыши. Срезы блокируют и обрабатывают первичным против холинацетилтрансферазы, а затем биотинилированными вторичными антителами. Добавляются комплексы авидин-биотин-пероксидаза, которые связываются со вторичными антителами, за которыми следует хромогенный субстрат. Затем срезы обезвоживаются и монтируются перед визуализацией под микроскопом.

В этом видео показана оценка поглощения дофамина в синаптосомах, собранных из мозга мышей. В нем описаны этапы подготовки синаптосомов к поглощению дофамина через транспортеры дофамина, обработки их различными концентрациями дофамина, меченного радиоактивными метками, выделения синаптосом и измерения радиоактивности для количественной оценки поглощения дофамина.

В этом видео показана процедура окрашивания неподвижных срезов мозга крысы, содержащих интернейроны, заполненные биоцитином. Протокол включает инкубацию с авидин-биотиновым комплексом (АВК), окрашивание HRP и хромогенным субстратом, консервирование структур с помощью тетраоксида осмия и встраивание ткани в смолу для визуализации.

В этом видео показано обнаружение синтеза РНК серотониновых рецепторов с помощью олигонуклеотидных зондов в тканях мозга крыс, пораженных серотониновым синдромом. Протокол включает предварительную обработку тканей, гибридизацию зонда и ферментативное обнаружение для визуализации и количественного определения экспрессии РНК рецептора серотонина под микроскопом.

В этом видео срез мозжечка мыши был использован для исследования синаптических взаимодействий между параллельными волокнами, восходящими волокнами и клетками Пуркинье, которые необходимы для моторного контроля. Стимуляция лазающих волокон индуцировала долгосрочную депрессию (LTD) в клетках Пуркинье, ослабляя синаптическую силу и приводя к снижению реакции на стимуляцию параллельных волокон.

В этом видео демонстрируется иммунофлуоресцентное окрашивание мозга трансгенной дрозофилы для визуализации глиальных клеток в одиночных клетках. Мозг экспрессирует мембранно-целевые белки, слитые с различными комбинациями антигенных эпитопов под контролем глиально-специфической рекомбиназной системы. Изолированный и неподвижный мозг окрашивают первичными антителами, специфичными к антигенным эпитопам, за которыми следуют флуорофор-конъюгированные вторичные антитела. Эта маркировка позволяет...

В этом видео демонстрируется стереотаксическая хирургическая процедура удаления слуховой коры у крыс. Эти шаги включают в себя определение анатомических ориентиров у крысы под наркозом, закрепленных в стереотаксической рамке, создание окна на черепе над слуховой корой, аспирацию корковых слоев и обеспечение послеоперационного ухода для оценки влияния абляции на обработку звука.

В этом видео мы описываем процедуру проведения флуоресцентного окрашивания с помощью флуоресцентной микроскопии для демонстрации окрашивания фаллоидином клеток нервного гребня, культивируемых на гидрогелях различной жесткости, для визуализации и анализа организации цитоскелета.

В этом видео демонстрируется сшивка белков нейронной поверхности с помощью бис-сульфосукцинимидилсуберата или BS3. Изолированный и охлажденный мозг мыши разрезан коронально. Нужный регион извлекается из срезов, измельчается и обрабатывается BS3. BS3 сшивает поверхностные белки, такие как рецепторы ГАМК, оставляя внутренние белки неизменными. Реакцию гасят глицином перед обработкой образцов для дальнейшего анализа.

Видео демонстрирует технику измерения поглощения глюкозы в моторных нейронах личинок дрозофилы с использованием внутриклеточного датчика глюкозы на основе флуоресцентного резонансного переноса энергии (FRET). После препарирования личинок для обнажения вентрального нервного канатика, моторные нейроны визуализируются с помощью флуоресценции, излучаемой донором датчика флуорофором. При стимуляции глюкозой FRET между донором сенсора и акцепторными флуорофорами вызывает излучение флуоресценции от...

В этом видео демонстрируется процедура иммуноокрашивания неподвижного участка ткани мозга мыши флуоресцентно меченными астроцитами с использованием первичных и вторичных антител и получение изображений окрашенных астроцитов с помощью конфокальной микроскопии.

В этом видео показано, как выделить клетки Пуркинье из посмертной ткани мозжечка человека с помощью микродиссекции с лазерным захватом.

В этом видео демонстрируется подробный пошаговый протокол подготовки замороженных срезов ткани мозга мыши к последующему анализу.

В этом видео демонстрируется разработка модели провоспалительной и дегенеративной культуры органов для ранней стадии заболевания межпозвоночных дисков (IVD) с использованием TNF-α. В нем описана процедура введения TNF-α в межпозвоночный диск и объясняются механизмы, с помощью которых TNF-α вызывает воспаление и деградацию IVD.

В этом видео демонстрируется диссоциация замороженной ткани мозга крысы в одноклеточную суспензию с помощью ферментативного расщепления и механической растирания. Подготовленные клетки фиксируют и проникают этанолом для последующих применений, таких как проточная цитометрия или анализ экспрессии генов.

В видеоролике продемонстрирован анализ состояния пальмитоилирования белков клеточных мембран, выделенных из ткани мозга мыши. Процесс включает в себя экспонирование непальмитоилированных цистеинов и их блокирование, а затем использование полимера, который связывается с пальмитоилированными цистеинами, помогая оценить состояние пальмитоилирования выделенных белков.

В этом видео демонстрируется метод изготовления полимерных микрогранул, которые инкапсулируют нейротоксичные клетки, секретирующие бета-амилоид. Клеточно-полимерная суспензия обрабатывается с помощью устройства для изготовления микрогранул, при этом гелеобразование полимера достигается путем сшивания кальция, образуя сферические микрогранулы вокруг клеток. Полимер обеспечивает пролиферацию клеток, обеспечивая при этом контролируемое, долгосрочное высвобождение бета-амилоида, имитируя его...

В видео показана пошаговая процедура симметричного препарирования неподвижного посмертного мозга человека, подготовки более мелких блоков тканей для дальнейшего анализа.

В этом видео показана процедура оценки способности митохондрий к удержанию кальция путем мониторинга изменений флуоресценции в режиме реального времени по мере поглощения кальция митохондриями. Этот анализ полезен для изучения функции митохондрий и процессов, связанных с кальцием, включая апоптоз и нейродегенеративные заболевания.

В этом видео демонстрируется влияние непрерывного вливания лекарств в мозг мыши на уровень глюкозы в крови. Метаболизм глюкозы оценивается путем сбора крови из хвоста натощакшей мыши и измерения уровня глюкозы до и после перорального введения глюкозы. Толерантность к инсулину оценивается путем введения инсулина мыши, при этом уровень глюкозы регистрируется через определенные промежутки времени.

В этом видео крыса под наркозом проходит офтальмологическую процедуру, во время которой магнитные шарики вводятся в переднюю камеру под действием магнитного поля, чтобы блокировать иридокорнеальный угол. Эта закупорка препятствует трабекулярной сети, препятствуя дренажу водянистой влаги и приводя к повышению внутриглазного давления, повреждая ганглиозные клетки сетчатки и зрительный нерв. При этом развивается состояние, подобное глаукоме.

Источник: Kummari, E., et. al., Лазерная микродиссекция захвата - демонстрация выделения отдельных дофаминовых нейронов и всей вентральной тегментальной области., J. Vis. exp. (2015)В этом видео мы демонстрируем протокол иммуногистохимии для дофаминовых нейронов в срезах ткани мозга для последующей микродиссекции лазерного захвата.

Источник: Bennett, S. A., et al., Характеристика посттрансляционных модификаций гистонов в моделях нейродегенеративной протеинопатии дрожжей. J. Vis. Exp. (2019). В этом видео показана процедура оценки модификаций гистонов в дрожжевых клетках с гиперэкспрессией нейродегенеративных белков. Этапы включают лизис клеток, центрифугирование, электрофорез, перенос мембраны и обнаружение модифицированных гистонов на основе антител.

Источник: Yan, Z., et al. Оценка антидепрессивного эффекта Xiaoyaosan на мышах с хроническим стрессом. J. Vis. Exp. (2019). В видеоролике демонстрируется процесс создания мышиной модели хронической стресс-индуцированной депрессии и оценки депрессивного поведения. Хроническое применение различных стрессоров вызывает высвобождение кортикостерона, что приводит к перевозбуждению нейронов и возможной гибели нейронов, что приводит к симптомам, похожим на депрессию, у мышей.

Источник: Bétemps, D., et al., Обнаружение ассоциированного с заболеванием α-синуклеина с помощью усиленного ИФА в мозге трансгенных мышей с гиперэкспрессией мутировавшего α-синуклеина A53T человека. J. Vis. Exp. (2015). В этом видео показана процедура обнаружения белка α-синуклеина, связанного с нейродегенеративными заболеваниями, в тканях мозга трансгенных мышей с помощью иммуноферментного анализа. Этапы включают гомогенизацию тканей, центрифугирование и обнаружение белка α-синуклеина...

Источник: Вульф, М., et.al. Протокол на основе лазерной микродиссекции для ЖХ-МС/МС анализа протеомного профиля гранул нейромеланина. J. Vis. Exp. (2021).В этом видео демонстрируется анализ образцов пептидов из гранул нейромеланина (NMG), выделенных из посмертной ткани мозга человека. Пептиды сначала разделяют с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), а затем анализируют с помощью масс-спектрометрии для определения их отношения массы к заряду (m/z). Целевые пептиды...

Источник: Zhi, L. et al., Измерение скорости потребления кислорода в острых срезах стриатального тела у взрослых мышей. J. Vis. Exp. (2022). В этом видео показано, как измерить скорость потребления кислорода митохондриями (OCR) в срезах мозга мышей полосатого тела. В нем подробно описаны этапы подготовки тканевой пластины и картриджа датчика, их загрузки в анализатор потоков, а также объясняются клеточные процессы, лежащие в основе OCR-паттернов.

Источник: Josiah, S. S., et al. Изучение функций и активности нейронального K-Cl ко-транспортера KCC2 с помощью вестерн-блоттинга. J. vis. exp. (2022). В видео показаны этапы обнаружения и количественного определения фосфорилированного белка хлоридного калий-котранспортера 2 (KCC2) в лизате клетки. Этот процесс включает в себя иммунопреципитацию для выделения фосфорилированного KCC2 и хемилюминесценцию для количественного определения выделенного белка.

Источник: Lani-Louzada, R., et al. Полное прижигание лимбального сосудистого сплетения при хирургически индуцированной глаукоме у грызунов. J. Vis. Exp. (2022). В этом видео демонстрируется количественная оценка ганглиозных клеток сетчатки из химически фиксированной сетчатки крысы, подвергнутой полному круговому прижиганию лимбального сосудистого сплетения. Процесс включает в себя пермеабилизацию, окрашивание антител и ядерное контрокрашивание с последующей визуализацией под эпифлуоресцентным...

Источник: Jensen, V. N., et al. Повторное измерение активности дыхательных мышц и вентиляции на мышиных моделях нервно-мышечных заболеваний. J. Vis. Exp. (2017). В этом видео демонстрируется метод одновременной записи сигналов плетизмографии и электромиографии в свободно движущейся модели мыши ALS. Процедура включает в себя использование имплантированных электродов и передатчика для захвата мышечной активности, а также плетизмографической камеры для мониторинга дыхания, чтобы исследовать роль...

Источник: Jiang, X., et al. Стимулирование и оценка мышиной модели экспериментальной близорукости. J. Vis. Exp. (2019)В этом видео демонстрируется процедура вызова близорукости у мыши с помощью установки специальной оправы объектива. Рамка крепится к обнаженному черепу с помощью стоматологического клея, а вогнутые линзы вставляются для смещения фокусной точки за сетчаткой. Такая установка стимулирует удлинение глазного яблока, что приводит к близорукости.

Источник: Джолли, С., et.al. Сочетание двойной флуоресценции in situ гибридизации с иммуномечением для обнаружения экспрессии трех генов в срезах мозга мыши. J. Vis. Exp. (2016). В этом видео демонстрируется использование двойной флуоресцентной гибридизации in situ для визуализации экспрессии двух РНК-мишеней в срезах мозга мыши. Протокол включает последовательное обнаружение РНК с помощью зондов, меченных флуоресцеином изотиоцианатом и дигоксигенином, с последующей усилением ферментативного...

Источник: Baleriola, J., et. al., обнаружение аксонально локализованных мРНК в срезах мозга с использованием гибридизации in situ с высоким разрешением. J. Vis. Exp. (2015)Это видео демонстрирует обнаружение мРНК в холинергических аксонах в фиксированных срезах гиппокампа мыши с использованием флуоресцентной гибридизации in situ и окрашивания антителами. Флуоресцентная микроскопия выявляет пространственную локализацию меченых зондом мРНК и холинацетилтрансферазы в холинергических нейронах.

Источник: Zhang, J., et al. Количественный иммунозолотой анализ мембранных рецепторов в синапсах ленты сетчатки с высоким разрешением. J. Vis. Exp. (2016)Это видео демонстрирует технику электронной микроскопии для визуализации локализации рецепторов нейротрансмиттеров в синапсах сетчатки. Срезы сетчатки содержат ганглиозные клетки сетчатки, которые проявляют мембраносвязанные нейротрансмиттеры рецепторы и помечены субъединицей холерного токсина B (CTB). После мечения маркеров антителами,...

Источник: de March, C. A. et. al., Мониторинг in vitro активации рецептора запаха одорантом в фазе пара в режиме реального времени. J. Vis. Exp. (2019)Это видео демонстрирует метод мониторинга активации рецепторов запаха в рекомбинантных клетках млекопитающих в режиме реального времени с помощью измерения люминесценции. Связывание с одорантом запускает активацию G-белка и выработку цАМФ, активируя глосенсорные белки, которые излучают люминесценцию при связывании с субстратом, обеспечивая...

Источник: Alluri, H., et al. Кислородно-глюкозное голодание и реоксигенация как модель повреждения ишемии-реперфузии in vitro для изучения гематоэнцефалического барьера. J. Vis. Exp. (2015). В видеоролике показана флуоресцентная локализация белков плотного соединения и стрессовых волокон в микрососудистых эндотелиальных клетках (RBMECs) головного мозга крыс. В стрессовом монослое флуоресцентно меченые антитела используются для маркировки белков плотного соединения, в то время как фаллоидин,...

Источник: Эйд, Л. и Парент, М. Подготовка ткани мозга нечеловекообразных приматов для предварительного встраивания иммуногистохимии и электронной микроскопии. J. Vis. Exp. (2017). В этом видео демонстрируется получение фиксированного альдегида нечеловеческой мозговой ткани приматов с использованием предварительной иммуногистохимии для электронной микроскопии. В нем описаны этапы иммуномаркировки специфического белка нейрона, за которыми следует пероксидазаная реакция, в результате которой...

Источник: Evilsizor, M. N., et. al., Учебник по иммуногистохимии на криосекционированной ткани мозга крысы: пример окрашивания микроглии и нейронов. J. Vis. Exp. (2015)Это видео демонстрирует пошаговую процедуру иммуногистохимического окрашивания на криосекционированной ткани мозга крысы для визуализации пространственного расположения микроглии и нейронов.

Источник: Кирхнер, К.Н., et al., Метод очистки гидрофобной ткани мозга крысы. J. Vis. Exp. (2020). В этом видео демонстрируется метод гидрофобной очистки ткани мозга крысы. Образец последовательно обезвоживают в метаноле, обрабатывают смесью дихлорметана и метанола для растворения липидов и пигментов и переносят на дибензиловый эфир для полного очищения тканей, что позволяет получить детальную визуализацию без тонких срезов.

Чтобы обнаружить эти бактерии, берут депарафинизированный, регидратированный, инфицированный бактериями участок мозга человека с подвергшимися воздействию белковыми антигенами и инактивированной эндогенной фосфатазой.

Вирус поражает пирамидальные нейроны в коре головного мозга, а экспрессируемые вирусные белки локализуются в внутрицитоплазматических зернистых структурах, известных как тельца включения.

Промойте, чтобы удалить парафин, затем увлажните ткань с помощью убывающей концентрации спирта.

Это видео демонстрирует выделение белков клеточной поверхности и внутриклеточных белков из культуры астроцитов. Культуру астроцитов помещают на лед для ингибирования эндоцитоза, а затем белки клеточной поверхности мечают реагентом для биотинилирования. Клетки лизируются для высвобождения биотинилированных белков клеточной поверхности и небиотинилированных внутриклеточных белков. Наконец, гранулы, покрытые стрептавидином, используются для отделения биотинилированных белков клеточной поверхности...

Это видео демонстрирует процесс внутримозговой инъекции для изучения распределения цитомегаловируса мышей (MCMV) в мозге неонатальной мыши. MCMV, разработанный для экспрессии усиленного зеленого флуоресцентного белка (EGFP) для обеспечения видимости, вводится в боковой желудочек мозга мышиного щенка. Введенный вирус циркулирует по спинномозговой жидкости, инфицируя клетки в перивентрикулярной области, включая маргинальную зону, сосудистое сплетение и субвентрикулярную зону.

Это видео демонстрирует создание in vitro модели вирусной инфекции Зика в развивающемся мозге. Органоиды головного мозга человека, содержащие розетки стволовых клеток, нейральные клетки-предшественники (NPC) и нейроны, инфицированы вирусом Зика. Вирус заражает NPC и вызывает апоптоз, нарушая развитие органоидов.

Видео демонстрирует микроинъекцию липополисахаридов (ЛПС) в мозг личинок данио-рерио, чтобы вызвать нейровоспаление. Личинки располагаются на чашке, выстланной агарозой, игла вводится в желудочки мозга, и вводится ЛПС. Введенный ЛПС запускает иммунный ответ, который приводит к нейровоспалению.

Это видео демонстрирует оценку здоровья митохондрий в генетически модифицированных астроцитах, которые экспрессируют флуоресцентный белок в своих митохондриях. Белок помогает отслеживать изменения в здоровье митохондрий, поскольку его флуоресценция меняется с зеленого на красный, что указывает на стресс или повреждение. Изображения захватываются и анализируются с использованием различных параметров.

Это видео демонстрирует процедуру введения химерных вирусов ВИЧ в кору головного мозга крысы, где РНК вируса интегрируется в геном хозяина, реплицируется и распространяется, чтобы установить активную ВИЧ-инфекцию в экспериментальной модели.

Это видео демонстрирует создание модели мыши с инфекцией ЦНС. Грудному щенку вводят вирус как внутричерепно, так и внутрибрюшинно. Вирус распространяется, заражая ЦНС, вызывая гибель нейрональных клеток и воспаление. По мере прогрессирования заболевания у щенка оцениваются на наличие симптомов инфекции.

Это видео демонстрирует генерацию нейровоспаления в мышиной модели. Берется мышь под наркозом с микроранами, и на раны наносится инокулюм вируса псевдобешенства (PRV). Вирус поражает периферические нервы, распространяется на ганглии дорсальных корешков (DRG) и далее поражает спинной и головной мозг. Инфицирование нейронов нервной системы приводит к иммунному ответу, который вызывает повреждение нейронов, что приводит к нейровоспалению.

Видео демонстрирует внутримозговую инъекцию суспензии вируса Зика взрослой мыши для индуцирования нейродегенерации. Мышь, находящаяся под наркозом, закрепляется в стереотаксической раме, а в обнаженном черепе просверливается отверстие для инъекции. В ткани мозга вводится суспензия вируса Зика. Вирусная инфекция вызывает воспаление, приводящее к нейродегенерации.

Это видео демонстрирует количественную оценку инфекционной бактериальной нагрузки от перфузированного мозга мыши, зараженного Listeria monocytogenes.

Это видео демонстрирует метод изучения проникновения через модель гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) in vitro с использованием астроцитов и эндотелиальных клеток на мембранной вставке со свободным FITC и ферритином, загруженным FITC. FITC-ферритин связывался с рецепторами на эндотелиальных клетках и проникал через мембранный барьер в нижнюю камеру, в то время как свободный FITC демонстрировал ограниченное проникновение и оставался в верхней камере.

В этом видео показана процедура инфицирования нервных стволовых клеток плода человека вирусом Зика. Инфицированные клетки могут быть использованы для дальнейших исследований.

В этом видео демонстрируется модель in vitro для изучения патогенов, пересекающих гематоэнцефалический барьер (ГЭБ). Микрососудистые эндотелиальные клетки, которые экспрессируют плотные соединения, образуют эндотелиальный слой в верхней камере, в то время как нейроны, астроциты и микроглия представляют собой паренхиму мозга в нижней камере, разделенную пористой мембраной. Вирусная инфекция в модели ГЭБ имитирует проникновение патогена из крови в мозг. При введении нейротропного вируса он...

Источник: Funes, S., et. al., Микроглия-подобные клетки человека: дифференцировка от индуцированных плюрипотентных стволовых клеток и анализ фагоцитоза живых клеток in vitro с использованием синаптосом человека. J. Vis. Exp. (2022)Это видео демонстрирует анализ для изучения фагоцитарной способности микроглиеподобных клеток с использованием pH-чувствительных флуоресцентных синаптосом, меченных красителями.

Погрузите ткань в ксилол, чтобы растворить парафин.

Внутривенно вводят меченный флуорофором альбумин, который проникает через поврежденный ГЭБ, достигая мозга.

В ткани обнаруживаются амилоидные фибриллы и аномальные белковые агрегаты в стенках сосудов головного мозга, которые являются ключевыми индикаторами неврологических расстройств.

MCCH характеризуется снижением притока крови к мозгу. Это ограничивает поступление кислорода и питательных веществ в слой эндотелиальных клеток кровеносных сосудов головного мозга, повреждая клетки.

Суспендировать клеточную смесь во внеклеточном матриксе или растворе ВКМ.

Сделайте разрез на шее, чтобы обнажить и свободно перевязать двусторонние общие сонные артерии.

Это видео демонстрирует метод индуцирования экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (EAE) путем введения пептидов, полученных из миелина, с адъювантом для активации аутореактивных Т-клеток, которые мигрируют в мозг. Коклюшный токсин вводится для повышения проницаемости гематоэнцефалического барьера, позволяя этим Т-клеткам и другим иммунным клеткам проникать в мозг. Эти иммунные клетки вызывают демиелинизацию, что приводит к нарушению нервной передачи и развитию EAE.

Это видео демонстрирует процедуру оценки разрушения гематоэнцефалического барьера в модели мыши EAE. Флуоресцентные красители разных размеров вводятся ретроорбитально и циркулируют по кровеносным сосудам мозга. Меньший краситель просачивается через щели в ткани мозга, в то время как более крупный краситель проникает только в том случае, если нарушение серьезное, коррелируя со степенью повреждения барьера.

Это видео демонстрирует процедуру индуцирования повреждения тканей или инфаркта на мосту крысы под наркозом с помощью электрической стимуляции.

В этом видео оплодотворенные эмбрионы данио-рерио дехорионизируются под стереомикроскопом, а затем подвергаются воздействию ингибитора синтеза холестерина, что приводит к развитию разрывов кровеносных сосудов и кровоизлияний в мозг у личинок. Геморрагические личинки, идентифицируемые по отчетливым красным пятнам, впоследствии разделяются под микроскопом для дальнейшего анализа.

Это видео демонстрирует процесс индуцирования разрушения гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) и микрокровоизлияний в мозг на модели крысы с использованием липополисахарида (ЛПС). В нем выделяется последовательность иммунных реакций, которые приводят к повышению проницаемости ГЭБ и последующему повреждению тканей мозга.

Это видео демонстрирует анализ для обнаружения микрокровоизлияний в мозг (CMH) в модели крысы. CMH — это кровоизлияния в мозг из-за нарушения гематоэнцефалического барьера, определяемого утечкой эритроцитов (эритроцитов). В модели крысы неподвижная ткань мозга криозащищена, разрезана и окрашена гематоксилин-эозином для эритроцитов, что позволяет микроскопически визуализировать КМХ. Утечки эритроцитов выглядят под микроскопом как красно-оранжевые.

Видео демонстрирует процедуру создания модели мыши для изучения гипоксически-ишемического повреждения головного мозга у новорожденных. В нем изложены шаги по хирургическому индуцированию ишемии и введению животного в гипоксию для усугубления повреждения мозга. Наконец, в нем показано, как оценить полученные повреждения головного мозга, чтобы убедиться, что мышиная модель подготовлена к дальнейшим научным исследованиям.

Это видео демонстрирует, как охарактеризовать внеклеточное пространство в срезе мозга с помощью микроэлектродов ионоселективного и ионофореза для измерения и сравнения электрических сигналов. Этот процесс помогает определить объемную долю пространства и степень скручивания.

В этом видео многоэлектродная решетка (MEA), покрытая глутаматоксидазой, имплантируется в мозговую ткань мыши, находящейся под наркозом. Раствор глутамата вводится во внеклеточное пространство, где MEA обнаруживает уровни глутамата, что позволяет в режиме реального времени контролировать поглощение глутамата астроцитами.

В этом видео генетически модифицированный мышиный детеныш, несущий ген Ccm2, окруженный сайтами loxP и Cre-рекомбиназой, слитой с рецептором эстрогена, используется для индуцирования церебральных кавернозных мальформаций (CCM). Введение 4-гидрокситамоксифена активирует Cre в эндотелиальных клетках, что приводит к делеции Ccm2 и образованию CCM в головном мозге.

Это видео демонстрирует процедуру выделения клеток мозга и инфильтрированных иммунных клеток из ишемизированных тканей мозга мышей путем ферментативного переваривания с последующим удалением клеточного мусора и миелина с помощью центрифугирования градиента плотности для изучения реакций на воспаление в исследованиях инсульта.

Видео демонстрирует индукцию субарахноидального кровоизлияния через эндоваскулярную перфорацию на мышиной модели. Разрез делается в области шеи мыши, находящейся под наркозом, для доступа к общей сонной артерии и ее раздвоению. Нить вводится через артерии для перфорации ветви внутричерепной артерии, вызывая субарахноидальное кровоизлияние.

В этом видео демонстрируется метод создания модели внутрижелудочкового кровоизлияния новорожденных на крысах. В ходе этой процедуры крысечонку под наркозом вводят гемоглобин в боковой желудочек головного мозга. Гемоглобин вызывает окислительный стресс и высвобождает гем, имитируя внутрижелудочковое кровоизлияние. Возникающее в результате повреждение тканей мозга, вызванное активными формами кислорода и воспалительными цитокинами, приводит к увеличению желудочков, что является распространенным...

В этом видео показана процедура выполнения постоянной дистальной окклюзии средней мозговой артерии, или MCAO, с общей сонной артерией, или лигирования CCA, у пожилых крыс для моделирования ишемического инсульта. Это блокирует приток крови к мозгу, что приводит к гибели нейронов и создает модель для изучения механизмов инсульта и потенциальных методов лечения.

В этом видео показана процедура установления модели крысы с субарахноидальным кровоизлиянием. Крысе, находящейся под наркозом, имплантируют зонды для измерения внутричерепного давления и мозгового кровотока. Целевой участок идентифицируется, и игла вводится в прехиазматическом положении. Затем аутологичная кровь вводится в субарахноидальное пространство, увеличивая внутричерепное давление и уменьшая мозговой кровоток, создавая модель.

Это видео демонстрирует экспериментальное исследование трансмиграции лимфоцитов через модель эндотелия гематоэнцефалического барьера (ГЭБ). Монослой микрососудистых эндотелиальных клеток головного мозга человека (HBMEC) генерируется in vitro, и к нему добавляются мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC), содержащие лимфоциты. Затем клетки инкубируются для обеспечения трансмиграции лимфоцитов, а мигрировавшие клетки количественно оцениваются с помощью проточной цитометрии.

В этом видео показана оценка зоны инфаркта и отека мозга в срезах мозга крыс, подвергшихся окклюзии средней мозговой артерии. Участки инфаркта идентифицируются с помощью окислительно-восстановительного окрашивания, в то время как синий фильтр и пороговая функция в программном обеспечении для анализа изображений количественно определяют зону инфаркта и отек в пораженном полушарии.

Это видео демонстрирует метод оценки трансэндотелиального электрического сопротивления (TEER) в микрососудистых эндотелиальных клетках мозга мыши in vitro. Высокое значение TEER указывает на интактные соединения эндотелиальных клеток, в то время как добавление активированных Т-клеток снижает значение TEER, отражая нарушение соединительного барьера.

В этом видео демонстрируется процедура симпатической денервации почечной артерии на мышиной модели гипертензивной мыши, вызванной ангиотензином II, с использованием фенола для нарушения функции симпатического нерва и снижения артериального давления.

В этом видео показан процесс индуцирования ишемического инсульта на модели крысы путем окклюзии средней мозговой артерии (МКА) с помощью резьбового болта. Процедура включает в себя перевязку сонных артерий, вставку нитевого болта в наружную сонную артерию и блокирование кровотока от MCA к мозгу, что приводит к гибели нейронов и имитирует ишемический инсульт.

В этом видео демонстрируется процедура репликации тромботического удара на мышиной модели путем блокирования правой общей сонной артерии и воздействия на мышь среды с низким содержанием кислорода. Этот процесс снижает приток крови и кислорода к мозгу, вызывая образование тромбов и повреждение мозга.

В этом видео показана точная техника индуцирования инсульта белого вещества у мышей под наркозом путем введения ингибитора оксида азота в целевые координаты мозга в пределах белого вещества. Это приводит к сужению кровеносных сосудов и угнетению кровоснабжения, что приводит к повреждению нейронов и инсульту головного мозга.

Источник: Wanderer, S., et al. Модель микрохирургической бифуркационной аневризмы артериального мешочка у кролика. J. Vis. Exp. (2020)В этом видео демонстрируется создание экспериментальной модели аневризмы у кролика с использованием обработанного эластазой сосудистого мешочка. После иссечения сегмента правого ОСА мешочек обрабатывают эластаза, затем пришивают к левому ОСА для восстановления кровотока. Возникающая нагрузка на ослабленные стенки мешка вызывает образование аневризмы.

Источник: Sharma, T. P., et al., Модель трансламинарной автономной системы для модуляции внутриглазного и внутричерепного давления в задних сегментах донора человека. J. Vis. Exp. (2020). В этом видео демонстрируется процедура подготовки человеческого глаза к изучению влияния трансламинарного давления на передачу сигналов ганглиозных клеток сетчатки путем моделирования внутриглазного и внутричерепного давления в трансламинарной автономной системе.

Источник: Лани-Лузада, Р., et al., Полное прижигание лимбального сосудистого сплетения при хирургически индуцированной глаукоме у грызунов. J. Vis. Exp. (2022)Это видео демонстрирует индукцию и мониторинг повышенного внутриглазного давления (ВГД) на модели крысы. Процесс включает в себя прижигание лимбальных кровеносных сосудов, что приводит к окклюзии сосудов и повышению ВГД. Затем крысе дают восстановиться, а ВГД регулярно контролируют как в экспериментальном, так и в контрольном глазах для...

Источник: Jungen, C., et al. Влияние внутрисердечных нейронов на электрофизиологию сердца и аритмогенез в системе Лангендорфа Ex vivo. J. Vis. Exp. (2018). В видеоролике демонстрируется методика ex vivo для стимуляции внутрисердечной нервной системы для оценки восприимчивости сердца к аритмии. С помощью перфузионного аппарата изолированное сердце мыши перфузируется кислородосодержащим буфером. Затем внутрисердечная нервная система стимулируется с высокой частотой, чтобы вызвать аритмии.

Источник: Хаким, М. А. et al., Выделение и функциональный анализ артериолярного эндотелия паренхимы мозга мыши. J. Vis. Exp. (2022). В этом видео демонстрируется функциональный анализ артериолярной эндотелиальной трубки, выделенной из мозга мыши. В нем описаны шаги по измерению внутриклеточных уровней кальция и мембранного потенциала, как на исходном уровне, так и в ответ на фармакологическую стимуляцию.

Источник: Tang, X. et. al., Массивное кровоизлияние через понтину путем двойной инъекции аутологичной крови. J. Vis. Exp. (2021)Этот протокол описывает контролируемое вливание аутологичной крови в понтинную область мозга крысы для моделирования массивного понтинного кровоизлияния. Цель состоит в том, чтобы смоделировать локализованное кровоизлияние в мозг за счет увеличения локализованного давления.

Источник: Alluri, H., et.al. Кислородно-глюкозное голодание и реоксигенация как модель ишемии-реперфузионного повреждения in vitro для изучения дисфункции гематоэнцефалического барьера. J. Vis. Exp. (2015).В видеоролике показано влияние кислородно-глюкозного голодания и последующей реоксигенации на микрососудистые эндотелиальные клетки (RBMECs) головного мозга крыс путем моделирования гипоксических и лишенных питательных веществ условий. Эти условия приводят к истощению АТФ, увеличению...

Источник: Gucciardo, E., et. al., Модель культуры тканей ex vivo для фиброваскулярных осложнений при пролиферативной диабетической ретинопатии. J. Vis. Exp. (2019)В этом видео подробно описан протокол иммуноокрашивания для культур фиброваскулярной ткани ex vivo, встроенных в фибриновый гель. Это позволяет детально визуализировать сосудистые изменения, связанные с пролиферативной диабетической...

Источник: Talley Watts, L., et al. Фототромбоз розовой бенгалии с помощью конфокальной оптической визуализации in vivo: модель инсульта одного сосуда. J. Vis. Exp. (2015)Это видео демонстрирует технику индуцирования образования тромбов в мозге мыши. Мышь под наркозом с черепным окном и истонченным черепом подвергается фототромбозу путем активации светочувствительного красителя с помощью света высокой интенсивности. В этом процессе образуются активные формы кислорода, которые повреждают стенки...

Источник: Kuts, R. et al. Лазерно-индуцированное повреждение головного мозга в моторной коре головного мозга крыс. J. Vis. exp. (2020)Это видео демонстрирует оценку целостности гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) после лазерно-индуцированного повреждения головного мозга у крыс. В хвостовую вену вводится краситель для слежения, что позволяет ему циркулировать в мозге и проникать в ткани через поврежденный ГЭБ. Затем мозг извлекается и обрабатывается для высвобождения красителя. Интенсивность...

Астроциты выделяют сигнальные молекулы, которые усиливают созревание и дифференцировку стволовых клеток в нейроны и астроциты.

Это видео показывает метод тестирования миграции интернейронов в ответ на хемопривлекательные сигналы от перивентрикулярных эндотелиальных клеток (PVEC). Интернейроны размещаются в центральном отсеке, с ПВЭК и контрольными клетками по обе стороны. Повышенная миграция к ПВЭК указывает на положительный ответ на их хемопривлекательные сигналы.

Это видео демонстрирует иммунофлуоресцентное окрашивание срезов органоидов мозжечка для идентификации специфических целевых антигенов, экспрессируемых в различных нейронах мозжечка, которые указывают на созревание органоидов.

Это видео демонстрирует метод идентификации нейронов из смешанной культуры гранулярных нейронов мозжечка и глиальных клеток с использованием двойного окрашивания флуоресцеином диацетатом (FDA) и йодидом пропидия (PI), где живые нейроны отображаются зеленым, а мертвые нейроны - красными.

Это видео демонстрирует подробный протокол иммуноокрашивания для визуализации фенотипических дефектов в грибовидных телах мутантного мозга дрозофилы. Протокол включает в себя использование антител против Fas2, белка, участвующего в аксональном руководстве, который способствует правильному морфологическому и функциональному развитию тела гриба.

Это видео демонстрирует процедуру окрашивания недавно пролиферировавших нейральных стволовых клеток в срезах ткани мозга с использованием включения EdU с последующей иммунофлуоресценцией для визуализации конкретных белков, улучшая понимание динамики и пролиферации клеток.

Это видео демонстрирует иммунофлуоресцентное окрашивание криоразделов из эмбриональных черепно-лицевых тканей мышей с использованием флуоресцентной микроскопии для оценки экспрессии ядерных маркеров и определения клеточной пролиферации и сигнальной активности.

Это видео демонстрирует, как нейронные везикулы помечаются специфическими флуоресцентными белками для визуализации их движения. Сначала плазмиду, кодирующую флуоресцентный белок, инкубируют с трансфективным агентом, а затем вводят в культуру нейронов. Впоследствии изображения нейронов получают и анализируют, чтобы отследить движение везикул.

Это видео демонстрирует измерение секреции ретиноевой кислоты (RA) из клеток нейросферы с использованием репортерных клеток RA. В нем описаны шаги, связанные с совместным культивированием клеток нейросферы с репортерными клетками РА и выполнением колориметрического анализа РА для измерения уровня РА.

Это видео демонстрирует иммуноокрашивание желудочно-кишечного тракта эмбриональной мыши для визуализации и анализа распределения нейрональной популяции с помощью иммунофлуоресценции и конфокальной микроскопии.

В этом видео демонстрируется вирусная маркировка и трансплантация клеток медиального ганглионарного возвышения (MGE) для исследований in vivo. В нем описаны этапы, связанные с трансдуцированием клеток MGE с вирусным репортером, трансплантацией этих трансдуцированных клеток в кору головного мозга детеныша мыши и обеспечением экспрессии репортеров в определенных подтипах интернейронов.

В этом видео показано выделение богатых рецепторами окситоцина ядер из мозга неонатальной крысы. Корональный срез с последующей идентификацией и точным пробивкой ядер мозга, богатых окситоциновыми рецепторами, позволяет эффективно извлекать ядра, богатые окситоциновыми рецепторами, для дальнейшего анализа.

Источник: Pericoli, G. et. al., Иммуноцитохимические анализы живых 3D-клеток диффузной средней глиомы у детей. J. Vis. Exp. (2021)Это видео демонстрирует визуализацию живых клеток для наблюдения за миграцией клеток диффузной средней линии глиомы у детей с использованием иммуногистохимического мечения антителами к CD44.

Источник: Jantzie, L. L., et. al. Моделирование энцефалопатии недоношенных с использованием пренатальной гипоксии-ишемии с внутриамниотическим липополисахаридом у крыс. J. Vis. Exp. (2015)Это видео демонстрирует протокол индуцирования гипоксически-ишемических и воспалительных состояний у плодных крыс путем ограничения кровотока матки и инъекции ЛПС, моделирования нейровоспаления и нарушения развития мозга, что имеет отношение к исследованиям преждевременных родов.

Источник: Larpthaveesarp, A., et. al. Модель транзиторной окклюзии средней мозговой артерии неонатального инсульта у крыс P10. J. vis. exp. (2017)В этом видео показано создание модели окклюзии средней мозговой артерии у щенка крысы. Внутренняя сонная артерия (ВСА) обнажается, и закрепляется лигатура для ограничения кровотока. Окклюза вводится через ВСА, чтобы добраться до средней мозговой артерии. Затем щенку дают восстановиться перед дальнейшим анализом.

Болезнь заставляет аутореактивные иммунные клетки атаковать белки миелина, разрушая миелиновую оболочку, окружающую нейронные аксоны.

На контрольном участке представлены аксоны с плотно упакованными миелиновыми оболочками, содержащими концентрические слои плазматической мембраны. На поврежденном срезе наблюдается декомпактированный миелин с большими промежутками.

Стресс нарушает функцию олигодендроцитов, нарушая богатую липидами миелиновую оболочку, окружающую нейронные аксоны в медиальной префронтальной коре, области мозга, регулирующей эмоции.

Это видео демонстрирует иммунопреципитацию фрагментов ДНК, сшитых с белком-мишенью из лизатов моторных нейронов, полученных из стволовых клеток, с использованием магнитных шариков, покрытых специфическими антителами-мишенями.

Это видео демонстрирует протокол оценки структурной целостности нервно-мышечных соединений в дорсальных продольных мышцах дрозофилы. Процедура включает в себя окрашивание нейронов и мышц двумя различными антителами и сравнение флуоресцентных паттернов у мутантных и диких мух. Снижение окрашивания нейронов у мутантных мух указывает на нейродегенерацию, при этом мышечная структура остается неповрежденной.

Это видео демонстрирует оценку нейродегенеративного воздействия тестового химического вещества на Caenorhabditis elegans с флуоресцентно помеченными нейронами. Нормальные нейроны демонстрируют яркую флуоресценцию интактных сом и отростков, в то время как уменьшенная флуоресценция, опухшая сома и прерывистые процессы указывают на нейродегенерацию.

Это видео демонстрирует метод создания модели нейропатии малых волокон у мышей с использованием агониста TRPV1 резинифератоксина (RTX). В нем описываются шаги, связанные с введением RTX мышам, и объясняется, как RTX вызывает гибель нейронов в сенсорных нейронах малого диаметра, тем самым создавая модель нейропатии.

В этом видео мышиная модель рассеянного склероза установлена с использованием экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (EAE). Мышке вводят эмульсию, содержащую нейрональный пептид и адъювант, что вызывает иммунный ответ, который активирует аутореактивные Т-клетки. Затем следует инъекция коклюшного токсина (ПТХ) для увеличения проницаемости гематоэнцефалического барьера, что позволяет автореактивным Т-клеткам проникать в мозг. Эта инфильтрация инициирует сигнальный каскад, который в...

Это видео демонстрирует процедуру индуцирования паралича путем переноса активированных клеток Th17, нацеленных на аквапорин-4, в мышиную модель. В центральной нервной системе активированные клетки Th17 взаимодействуют с астроцитами, экспрессирующими аквапорин-4, вызывая иммунный ответ, который приводит к параличу хвоста и конечностей у мышей.

Это видео демонстрирует процесс оценки двигательной дисфункции на мышиной модели с помощью введения коклюшного токсина и инокулюма, содержащего миелиновые пептиды и адъюванты, с последующими тестами на беговой дорожке для оценки двигательной функции и оценки результирующего повреждения нервов из-за иммунной активации и демиелинизации.

В этом видео демонстрируется лестничный тест для оценки двигательной функции у гемипаркинсонической крысы с поражением правого полушария мозга. Поражение нарушает передачу сигналов дофамина, ухудшая контроль левой лапы, что приводит к тому, что на левой лестнице остается больше гранул, что указывает на двигательную дисфункцию.

Это видео демонстрирует использование радиального анализа локомоции для оценки моторной дисфункции у C. elegans, экспрессирующих либо дикий тип, либо ALS-мутантный человеческий белок TDP-43. Червям с различными уровнями экспрессии TDP-43 дикого типа или мутантного типа разрешается ползать, и их движение измеряется радиальным расстоянием, пройденным от центральной точки на пластине для анализа. В анализе различают легкие, умеренные и тяжелые двигательные нарушения в зависимости от расстояния,...

В этом видео демонстрируется оценка мышцы с использованием культивируемых моторных нейронов, шванновских клеток и миотрубок с последующим лечением нервно-мышечным блокатором для подавления сокращения. Графика с цветовой кодировкой времени показывает графику с цветовой кодировкой. Красным цветом обозначено самое быстрое движение, а синим — самое медленное.

Это видео демонстрирует визуализацию белок-белковых взаимодействий в нервно-мышечном переходе дрозофилы (NMJ) с использованием анализа близости-лигирования (PLA). После выделения стенок организма взаимодействующие белки зондируются первичными антителами и PLA-конъюгированными вторичными антителами. Близость взаимодействующих белков облегчает лигирование зондов с коннекторными олигонуклеотидами, образуя кольцевую ДНК, которая затем амплифицируется путем амплификации по вращающемуся кругу.

Источник: Вагнер, К. et al., Изучение переноса мембранных белков в клетках фоторецепторов дрозофилы с использованием белков, помеченных eGFP. J. vis. Exp. (2022). В этом видео демонстрируется визуализация переноса мембранных белков в клетках фоторецепторов дрозофилы с использованием белков TRPL, меченных eGFP. В нем подробно описывается подготовка трансгенных мух к визуализации, получение флуоресцентных изображений фоторецепторных клеток и количественная оценка трафика TRPL путем измерения...

Источник: Deseure, K., et al. Хроническая констрикционная травма подглазничного нерва крысы (IoN-CCI) для изучения нейропатической боли тройничного нерва. J. Vis. Exp. (2015). В этом видео демонстрируется метод индуцирования нейропатической боли на модели крысы путем сужения подглазничного нерва. После обнажения подглазничного нерва и связывания лигатур для его сужения, иммунный ответ в месте повреждения увеличивает возбудимость соседних нейронов, которые передают болевые сигналы в мозг.

Источник: Бракки, Э. М., и др. Хирургия и поведенческое тестирование в модели транспозиции невриномы большеберцовой кости у крыс. J. Vis. Exp. (2023). В этом видео показана процедура создания модели транспозиции невриномы большеберцовой кости (ТНТ) крысы. После обнажения большеберцового нерва в задней ноге крысы, находящейся под наркозом, пересеките нерв. Далее создайте подкожный туннель, проденьте через него оторванный нерв и зашите его на месте. При отсутствии мишени для реиннервации...

Источник: Lee, D. et. al., Модифицированные экспериментальные условия для потери слуха, вызванной шумом, у мышей и оценки слуховой функции и повреждения наружных волосковых клеток. J. Vis. Exp. (2023)Это видео демонстрирует процедуру потери слуха, вызванной шумом, у мышей. Громкий звук повреждает волосковые клетки во внутреннем ухе и нарушает слуховые пути, что приводит к ухудшению слуха.

Источник: Lee, D., et. al. Модифицированные экспериментальные условия для потери слуха, вызванной шумом, у мышей и оценки слуховой функции и повреждения наружных волосковых клеток. J. vis. exp. (2023)В этом видео показано измерение слуховой реакции ствола мозга (ABR) у мыши. Электроды размещаются на голове, за ухом и рядом с хвостом мыши, находящейся под наркозом. Акустические стимулы доставляются с различной интенсивностью, а генерируемые электрические сигналы записываются в виде волн.

Источник: Олмстед, Д. Н., et al., Аксотомия лицевого нерва у мышей: модель для изучения реакции мотонейронов на травму. J. Vis. Exp. (2015). В этом видео показана процедура сдавливания лицевого нерва у мыши, при которой тупое вскрытие через ключевые ориентиры обнажает ствол лицевого нерва в шиломалоидном отверстии. Затем щипцы используются для сжатия нервного ствола, вызывая повреждение аксонов и нарушая передачу нейронного сигнала.

Источник: Cheah, M., et al. Инъекция ганглия дорсального корешка и травма дробления дорсального корешка как модель сенсорной регенерации аксонов. J. Vis. Exp. (2017). В этом видео показана пошаговая процедура введения вирусной суспензии в ганглии дорсальных корешков (DRGs) и индуцирования контролируемого повреждения аксонов путем дробления дорсального корешка у крысы под наркозом. Протокол включает в себя воздействие DRG, доставку вирусного вектора, способствующего росту, для облегчения...

Чтобы обнаружить апоптотическую гибель клеток с помощью анализа TUNEL, обработайте срез мозга ферментом протеиназа-К.

С помощью флуоресцентной микроскопии визуализируйте поврежденный нерв, в котором наблюдается прогрессирующее увеличение отеков и разъединения аксонов.

Инкапсуляция препарата повышает специфичность опухолевых клеток и снижает нейротоксичность.

Это видео демонстрирует доставку черепно-мозговой травмы (ЧМТ) у мышей. После обнажения черепа место ЧМТ помечается. Затем мышь помещается под устройством TBI. Удар наносится путем поднятия металлического стержня и его свободного опускания на ударный элемент, который соприкасается с черепом.

Это видео демонстрирует иммунофлуоресцентное окрашивание нейронов гиппокампа крысы, культивируемых в микрофлюидном чипе, для анализа созревания нейронов и связей.

Это видео демонстрирует генерацию модели повреждения нейронов в первичных нейронах мозжечковой гранулы мыши. В нем описаны шаги, связанные с индуцированием повреждения нейронов с использованием NMDA, возбуждающего агониста рецептора нейротрансмиттера, и глицина, ко-агониста. NMDA и глицин связываются со специфическими рецепторами нейронов, вызывая их гиперстимуляцию и приводя к массивному внутриклеточному притоку кальция, что приводит к повреждению и гибели нейрональных клеток.

Это видео демонстрирует иммунофлуоресцентное окрашивание среза мозга мыши для количественной оценки распределения специфического пресинаптического белка. Процесс включает в себя блокирование неспецифических сайтов, применение первичных антител к белку-мишени и референсного маркера с последующим мечением вторичными антителами и ядерным контрокрашиванием. Референсный маркер обеспечивает точную количественную оценку, обеспечивая согласованный исходный уровень, а распределение пресинаптического...

Это видео демонстрирует метод исследования черепно-мозговой травмы личинки данио-рерио с использованием крупномасштабной сканирующей просвечивающей электронной микроскопии (STEM), метода, который сочетает в себе элементы как сканирующей электронной микроскопии (SEM), так и просвечивающей электронной микроскопии (TEM) для получения изображений с высоким разрешением. В нем описываются шаги, связанные с подготовкой образцов и получением изображений STEM с высоким разрешением для выявления...

Это видео демонстрирует хирургический протокол на модели крысы, подробно описывая этапы от подготовки к анестезии до индукции повреждения лицевого нерва. Этот протокол полезен для изучения регенерации нервов и хирургических техник в медицинских исследованиях.

Это видео демонстрирует процедуру индуцирования черепно-мозговой травмы открытого черепа у мыши путем разреза средней линии черепа, сверления черепа и удаления костного лоскута для обнажения коры головного мозга, а также приложения высокого давления для индуцирования травмы. Затем рана зашивается, чтобы подготовить мышиную модель к последующим экспериментам.

Это видео демонстрирует процедуру индуцирования смерти мозга на мышиной модели путем увеличения контролируемого внутричерепного давления через баллонный катетер, имитируя естественную смерть мозга.

Это видео демонстрирует процедуру создания точного, контролируемого повреждения головного мозга в моторной коре крысы с помощью лазера.

Это видео демонстрирует биотинилирование и флуоресцентное мечение модифицированных сиалогликопротеинов в первичных нейральных стволовых и прогениторных клетках, а также нейронах, а также их визуализацию с помощью флуоресцентной микроскопии.

В этом видео устройство с ударной трубкой используется для генерации ударной волны путем разрыва полимерной диафрагмы с помощью контролируемого давления. Ударная волна воздействует на срезы мозга, содержащиеся в надежном пакете, вызывая травматическое повреждение среза мозга.

Это видео демонстрирует процедуру подготовки культивируемых нейронов к оптическому анализу переработанных синаптических везикул. Процесс включает в себя флуоресцентное мечение белков синаптических везикул и иммуноокрашивание для маркировки и визуализации переработанных везикул в нейронах.

В этом видео демонстрируется процесс индуцирования растяжения индуцированных плюрипотентных стволовых клеток нейронов человека (hiPSCN). Клетки отбираются в бездонную многолуночную пластину с прикрепленной силиконовой мембраной. Контролируемое механическое напряжение прикладывается к мембране, чтобы вызвать нарушение цитоскелета и повреждение клеточной мембраны, вызывая фенотип растяжения в клетках.

Это видео демонстрирует процедуру нанесения закрытой черепно-мозговой травматической травмы у мух дрозофилы, находящихся под наркозом, с помощью ударного устройства с газовым ударным механизмом. Травма влияет на функцию нейронов и ухудшает способность ходить.

Это видео демонстрирует процедуру травмы коры головного мозга у мышей, включающую обнажение черепа и создание поражения мозга. Он индуцирует реактивный астроглиоз, нейропротекторную реакцию астроцитов, для изучения травмы ЦНС, воспаления и механизмов восстановления.

Видео демонстрирует метод создания мышиной модели черепно-мозговой травмы (ЧМТ) с использованием устройства для перкуссии боковой жидкости (LFPI). После обезболивания мыши мозг подвергается воздействию путем создания окна на черепе. Канюля, наполненная солевым раствором, прикрепляется к окну, а затем подключается к LFPI. Маятник устройства отпускается для создания импульса давления, который наносит черепно-мозговую травму.

Это видео демонстрирует процедуру индуцирования черепно-мозговой травмы (ЧМТ) на мышиной модели. Мышь под наркозом с открытым черепом берется для создания отверстия в черепе, а затем с помощью ударного устройства вызывается контролируемая кортикальная травма. Травма повреждает ткани мозга, вызывая нарушение когнитивных функций и координации движений.

В этом видео показана хирургическая процедура выполнения грудной гемисекции спинного мозга у крыс. В нем описаны шаги по обнажению сегмента спинного мозга Т8, выполнению гемисекции для нарушения нервных путей с одной стороны и обеспечению послеоперационного ухода.

В этом видео демонстрируется метод индуцирования целевого повреждения нейронов у личинок Drosophila с использованием мощного лазера. После позиционирования личинки под микроскопом маломощный лазер сканирует флуоресцентные нейроны, а затем мощность лазера увеличивается, чтобы вызвать локализованное повреждение. Травма подтверждается повышенной флуоресценцией и кратером в месте травмы.

В видео демонстрируется использование устройства для лечения травмы высокого напряжения (HIT) для индуцирования закрытой черепно-мозговой травмы (ЧМТ) у Drosophila. ЧМТ вызывает механическую травму головного мозга, влияющую на функцию нейронов, что со временем приводит к нейродегенерации и смертности.

В этом видео демонстрируется индукция проникающего черепно-мозгового повреждения в мозге дрозофилы. Вновь появившихся мух отбирают, обезболивают и помещают под флуоресцентный стереомикроскоп. Тело гриба, экспрессирующего GFP, идентифицируется, и вставляется булавка Minutien, чтобы причинить травму. Мухам дают восстановиться для дальнейших исследований.

Источник: Шандра, О. et al., Индуцирование посттравматической эпилепсии у мышей с повторяющейся диффузной черепно-мозговой травмой. J. Vis. Exp.

Это видео демонстрирует индукцию черепно-мозговой травмы (ЧМТ) у крысы с помощью устройства для боковой перкуссионной травмы жидкостью (FPI). Процедура включает в себя создание отверстия в черепе крысы, находящейся под наркозом, чтобы обнажить твердую мозговую оболочку, к которой прикреплена канюля. Затем крысу подключают к устройству, которое генерирует волну давления, достигающую мозга, имитируя ЧМТ, вызывая гибель нервных клеток и повреждение...

Источник: Янг, З., et.al. Повторяющаяся модель сотрясения головы у мышей. J. Vis. Exp. (2016). В этом видео демонстрируется индукция повторяющихся сотрясений мозга у мышей с помощью электромагнитного ударного устройства. Процедура включает в себя размещение ударного наконечника между межлобным и лямбдоидным швами на черепе мыши, находящейся под наркозом, и использование наконечника зонда для точной установки глубины удара. Удар наносится с контролируемой скоростью и глубиной, чтобы...

Источник: Логсдон, А. Ф., et al. Модель взрывной волны низкой интенсивности для доклинической оценки закрытой головы легкой черепно-мозговой травмы у грызунов. (2020)В этом видео демонстрируется индукция легкой черепно-мозговой травмы закрытой головы на мышиной модели с использованием газовой ударной трубки под давлением. Генерируемая волна давления разрывает полиэфирную мембрану, доставляя ударную волну в голову мыши, что приводит к быстрому движению мозга внутри черепа, вызывая легкую...

Источник: Macheda, T., et. al. Электромагнитная управляемая модель легкой черепно-мозговой травмы у мышей. J. Vis. Exp. (2022)Это видео демонстрирует процедуру индуцирования закрытой черепно-мозговой травмы на мышиной модели с использованием стереотаксической рамки. Контролируемое воздействие воспроизводит легкую черепно-мозговую травму, что позволяет исследователям изучать неврологические эффекты и восстановление, измеряя посттравматические рефлексы и поведение.

Источник: Elzat, E. Y. Y., et al., Создание модели травмы спинного мозга при ушибе мыши на основе минимально инвазивной техники. J. Vis. Exp. (2022). В этом видео демонстрируется метод индуцирования контузионной травмы на уровне Т9 спинного мозга на мышиной модели с использованием коаксиальной платформы для повреждения спинного мозга. На спинной мозг уровня Т9 падает груз, который создает ушиб, который немедленно вызывает обесцвечивание и отек тканей.

Источник: Лакшман, Н., et al. Нейросферный анализ для оценки активации эндогенных нейральных стволовых клеток в мышиной модели минимального повреждения спинного мозга. J. Vis. Exp. (2018). В этом видео демонстрируется активация и миграция нейральных стволовых клеток (НСК) в модели травмы спинного мозга у мыши. Чтобы обнажить спинной мозг, у мыши, находящейся под наркозом, удаляют позвонок из грудного отдела позвоночника. Затем в белом веществе спинного мозга создается поверхностная травма с...

Источник: Kumar, S., et. al. Мышиная модель пролежней после травмы спинного мозга. J. Vis. Exp. (2019)Это видео демонстрирует подробную индукцию травмы спинного мозга у мышей. Мышь под наркозом препарируют, чтобы обнажить позвонки T9-T10, и удаляют их остистые отростки. Затем обнаженный спинной мозг пересекается для нанесения травмы. Затем операционная область закрывается, и мышь восстанавливается.

Это видео демонстрирует метод оценки интернализации целевого белка в кортикальных астроцитах мыши с использованием биотинилирования с последующим лизисом клеток, экстракцией белка на основе стрептавидина, денатурацией и вестерн-блоттингом для подтверждения успешной интернализации.

Это видео демонстрирует метод оценки активности белка с использованием нейронов гиппокампа над структурированными белковыми зонами. Нейроны демонстрируют отталкивание в зонах тестового белка и прикрепление в зонах контрольного белка, подчеркивая эффекты притягивающей или отталкивающей активности белка.

Это видео демонстрирует индукцию глаукомы у крысы под наркозом путем введения гипертонического раствора в эписклеральную вену. Физиологический раствор попадает в трабекулярную сеть через канал Шлемма, вызывая рубцевание тканей, которое блокирует отток водянистой влаги и повышает внутриглазное давление. Повышенное давление повреждает ганглиозные клетки сетчатки, что приводит к глаукоме.

Гомогенизируйте ткань с помощью гомогенизатора, чтобы высвободить белки, включая декарбоксилазу глутаминовой кислоты или изоформы фермента GAD, необходимые для работы мозга.

Это видео демонстрирует процедуру хирургического доступа к зрительному нерву у животного, находящегося под наркозом, и точной доставки лизолецитина для индуцирования фокальной демиелинизации, создавая невропатологические условия для дальнейшего изучения.

Инкубируйте срез в aCSF, содержащем флуоресцентные ложные нейротрансмиттеры или FFN.

В этом видео показана индукция судорог, вызванных обработкой, у мыши, инфицированной вирусом мышиного энцефаломиелита Тейлера (TMEV). Зараженная мышь, у которой есть гипервозбудимые нейроны, подвергается воздействию внешних физических раздражителей. Это воздействие вызывает стресс, приводящий к аномальной электрической активности в нейронах, что приводит к судорогам.

В этом видео показана процедура индуцирования тепловых припадков у трансгенной мыши с мутациями генов, связанных с эпилепсией, путем постепенного повышения температуры тела в контролируемой камере. Этот протокол используется для изучения механизмов припадков и потенциальных методов лечения эпилепсии.

В этом видео демонстрируется индукция иктальных событий в срезах корональной коры у трансгенной мыши, экспрессирующей активируемые светом катионные каналы в корковых возбуждающих пирамидальных нейронах. Срез помещают в записывающую камеру, а записывающий электрод вставляют в поверхностный корковый слой. При перфузии препаратом, вызывающим судороги, который блокирует калиевые каналы, нейроны становятся гипервозбудимыми и генерируют спонтанные иктальные события. Для генерации иктальных событий по...

В этом видео демонстрируется процесс индуцирования эпилепсии у мышей с помощью инъекций пентилентетразола (PTZ), антагониста рецепторов ГАМК-А. Повторное внутрибрюшинное введение ПТЗ постепенно снижает порог судорог, подавляя приток ионов хлорида, нарушая тормозную нейротрансмиссию и приводя к гипервозбудимости нейронов, вызывающих судороги. Этот процесс приводит к разжиганию и развитию спонтанных припадков, имитирующих хроническую эпилепсию.

Источник: Soukupová, M., et al. Микродиализ возбуждающих аминокислот во время записи ЭЭГ у свободно передвигающихся крыс. J. Vis. Exp. (2018)Это видео демонстрирует оценку уровней внеклеточных возбуждающих нейротрансмиттеров у крыс с индукцией хронической эпилепсии. После имплантации микродиализного зонда в мозг и подтверждения отсутствия судорог с помощью электроэнцефалографии (ЭЭГ) проводится сбор внеклеточной жидкости для оценки повышенного уровня нейромедиаторов у крыс-эпилептиков. Затем...

Источник: Schönherr, S., et. al. Комбинированное оптогенетическое и замораживающее иммуномаркирование реплики для изучения входного специфичного расположения глутаматных рецепторов в миндалевидном теле мыши. J. vis. exp. (2016)В этом видео демонстрируется иммуномаркировка лихорадочных реплик ткани мозга мыши с помощью электронной микроскопии. Раздробленные и покрытые оболочкой реплики расщепляются для обнажения рецепторов. Первичные и помеченные золотом вторичные антитела добавляются для...

В этом видео клетки глиобластомы и микроглии смешиваются с раствором полимерной матрицы и переносятся во вставку из пористой камеры, где образуется гель, встраивающий клетки. Микроглия стимулирует миграцию клеток глиобластомы через пористую вставку, имитируя инвазию опухолевых клеток в окружающие ткани, после чего клетки фиксируются и подготавливаются к дальнейшему анализу.

В этом видео демонстрируется метод, позволяющий перенести флуоресцентно меченые митохондрии в стволовые клетки глиобластомы (ГСК) с помощью центрифугирования. Успешное поглощение и функциональная интеграция донорских митохондрий подтверждаются обнаружением флуоресценции с помощью конфокальной микроскопии.

Источник: Guyon, J., et al. 3D-модель сфероида для глиобластомы. J. vis. exp. (2020)В видео демонстрируется создание трехмерной сфероидальной модели инвазии опухолевых клеток. Сфероиды образуются из опухолевых клеток мозга человека и встраиваются в коллагеновую матрицу. Опухолевые клетки на периферии сфероида принимают инвазивный фенотип, выделяя протеазы для разрушения коллагена и продвигаясь к вторжению в окружающий матрикс.

Источник: Lim, M., et al. Моделирование метастазирования в мозг путем инъекции раковых клеток во внутреннюю сонную артерию. J. Vis. Exp. (2022)В этом видео мышь под наркозом подвергается хирургической процедуре, при которой раковые клетки вводятся в общую сонную артерию (CCA) для обеспечения адресной доставки в мозг. Процедура включает в себя точное наложение швов и манипуляции с сонными артериями, чтобы направить введенные клетки к внутренней сонной артерии (ICA), способствуя образованию...

Источник: Ear, P. H., et. al. Установление и характеристика сфероидов нейроэндокринных опухолей тонкой кишки. J. Vis. Exp. (2019)Это видео демонстрирует иммунофлуоресцентное окрашивание сфероидов нейроэндокринных опухолей тонкой кишки. Сфероиды фиксируются, проникают и блокируются, а затем инкубируются с первичными и вторичными антителами. Краситель добавляется к окрашиванию ядер перед монтажом и визуализацией их под флуоресцентным микроскопом.

Источник: Mudduluru, G., et. al. Измерение миграции и инвазии раковых клеток в реальном времени на основе импеданса. J. Vis. Exp. (2020)Это видео демонстрирует импедансный анализ для измерения инвазии и миграции клеток глиобластомы. Клетки разрушают внеклеточный матрикс, перемещаются через микропористые мембраны и прилипают к электродам, генерируя импеданс. Этот анализ в режиме реального времени отражает их инвазивный потенциал для исследований рака.

Источник: Bolcaen, J., et. al., облучение под контролем ПЭТ и МРТ модели крысы с глиобластомой с использованием микрооблучателя. J. Vis. Exp. (2017)Это видео демонстрирует процедуру создания модели крысы с глиобластомой путем стереотаксического введения клеток глиобластомы, вызывающей опухоль головного мозга, в префронтальную кору.

Источник: Мендес, Ф. М. et al., Нативная иммунопреципитация хроматина с использованием нейросфер опухолей головного мозга мышей. J. Vis. Exp. (2018). В этом видео демонстрируется выделение комплексов белок-ДНК из клеток нейросферы, полученных из опухоли мозга мыши, с использованием нативной иммунопреципитации хроматина. В нем подробно описаны этапы подготовки хроматина, иммунопреципитации, промывки и переваривания белка для высвобождения ДНК для последующего анализа.

Источник: Núñez, F. J., et al. Оценка биомаркеров у глиомы с помощью иммуногистохимии на встроенных в парафин 3D-культурах нейросферы глиомы. J. Vis. Exp. (2019). В этом видео демонстрируется иммуногистохимический метод мечения биомаркеров опухолей в нейросферах опухолей головного мозга, встроенных в парафин. Срезы нейросферы подвергаются удалению парафина и регидратации с последующей обработкой для выявления участков биомаркеров. Затем наносятся первичные и вторичные антитела для маркировки...