Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Моделирование повреждения нейронов в первичных гранулярных нейронах мозжечка мышей

861 просмотров

⸱

8 июля 2025 г.

В этой статье

Аннотация

Источник: Laaper, M. et al., Моделирование гибели и дегенерации нейронов в первичных нейронах мозжечковой гранулы мыши.J. Vis. Exp. (2017).

Это видео демонстрирует генерацию модели повреждения нейронов в первичных нейронах мозжечковой гранулы мыши. В нем описаны шаги, связанные с индуцированием повреждения нейронов с использованием NMDA, возбуждающего агониста рецептора нейротрансмиттера, и глицина, ко-агониста. NMDA и глицин связываются со специфическими рецепторами нейронов, вызывая их гиперстимуляцию и приводя к массивному внутриклеточному притоку кальция, что приводит к повреждению и гибели нейрональных клеток.

Протокол

1. Подготовка к эксперименту

ПРИМЕЧАНИЕ: Следующие исходные растворы могут быть приготовлены и сохранены до использования.

  1. Раствор для вскрытия
    1. Растворите 3,62 г хлорида натрия (NaCl), 0,2 г хлорида калия (KCl), 0,069 г фосфата натрия (2PO4 ∙ H2O) и 1,306 г D-(+)-глюкозы в 500 мл дистиллированного H2O. Затем добавьте в раствор 12,5 мл буфера HEPES, 450 мкл раствора фенолового красного и 20 мл бычьего сывороточного альбумина (BSA) фракции V. Отрегулируйте pH до 7,4 с помощью 1 Н гидроксида натрия (NaOH).
    2. Стерилизо....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

figure-results-1
Рисунок 1: Удаление мозга мыши и вскрытие мозжечка. (А) Чтобы извлечь мозг мыши в возрасте 6-7 дней, с помощью щипцов возьмите голову и разрежьте кожу спереди по пунктирным линиям с помощью ножниц для микродиссекции. Будьте осторожны и режьте только кожу и соединительную ткань, слишком глубокий разрез может проколоть череп и повредить мозг. Эти три разреза, прямые по средней линии, и.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Конфликт интересов не декларируется.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
набор для титрования лентивитрального титрования qPCR ПРО#LV900
Решение для быстрой очистки от вирусов ПРО#LV999
pCMV-dR8.2Адджен#8455
pCMV-VS.VGАдджен#8454
Дистиллированная вода Gibco#15230162
200 мМ L-глютамина Gibco#25030081
Посуды для культуры Nunc 35 ммGibco#174913
PowerUP SYBR зеленый мастер-миксТехнологии Life#A25742
Решение BSA VСигма Олдрич#A-8412
CaCl2 • 2H2OСигма Олдрич#C-7902
КамптотекинСигма Олдрич#C-9911
Ингибитор трипсина куриного яичного белка Сигма Олдрич#10109878001
Цитозин бета-D-арабино фуранозидСигма Олдрич#C-1768 гг
D-(+)-глюкоза Сигма Олдрич#G-7528
ДНКаза1 Сигма Олдрич#11284932001
Eagle-minimal essential mediumСигма Олдрич#M-2279
глицинСигма Олдрич#G-5417
Инактивированная при нагревании диализованная фетальная бычья сыворотка Сигма Олдрич#F-0392
Буфер из хепса Сигма Олдрич#H-0887
перекись водородаСигма Олдрич#216763
50 мг/мл гентамицина Сигма Олдрич#G-1397
MgSO4 Сигма Олдрич#M-2643
N-метил-D-аспарагиновая кислотаСигма Олдрич#M-3262
Феноловый красный раствор Сигма Олдрич#P-0290
трипсин Сигма Олдрич#T-4549
Липофектамин 3000Thermo Fisher ScientificЛ3000-008
P3000 Реагент-усилительThermo Fisher ScientificЛ3000-008
Opti-MEM I Средство для пониженной сывороткиThermo Fisher Scientific31985070
KCl ВВР#CABDH9258
NaCl ВВР#CABDH9286
NaH2PO4H2O ВВР#CABDH9298
Поли D-лизин ВВР#89134-858
DMEMзубр#319-005-CL
ФБСзубр#080-450
. гг.

Больше статей

Модель повреждения нейроновзернистые нейроны мозжечка мышиNMDA-эксайтотоксичностьглицин как коагонистприток кальцияповреждение мембранокислительный стрессповреждение ДНКанализ гибели клетокпервичная культура нейронов