Иммунофлуоресцентное окрашивание для визуализации пролиферировавших нейральных стволовых клеток в срезах мозга мышей

Аннотация

Источник: Quintanilla, L. J., et al. Специфическая регуляция контура анализа нервных клеток-предшественников взрослого гиппокампа. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует процедуру окрашивания недавно пролиферировавших нейральных стволовых клеток в срезах ткани мозга с использованием включения EdU с последующей иммунофлуоресценцией для визуализации конкретных белков, улучшая понимание динамики и пролиферации клеток.

Протокол

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных.

1. Иммуногистохимия

1. Окрашивание аналогом тимидина
   1. Поместите срезы ткани в PBS (фосфатно-солевой буфер) и установите 5−8 срезов на положительно заряженное предметное стекло, сохраняя последовательный порядок от переднего к заднему и ту же ориентацию. Дайте срезам ткани высохнуть, чтобы они полностью прилипли к предметным стеклам, а затем нарисуйте границу с помощью гидрофобной ручки или ручки ПАП.
   2. Пермеабилизируйте срезы пермеабилизационным ....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
5-этинил-2'-дезоксиуридин (Edu)	Карбосинт	NE08701
Alexa-488 Азид	Thermo Fisher Scientific	А10266
Антикуриный Нестин	Авес	РЭШ; РРИД: AB_2314882
Антикозий DCX	Санта-Крус	Кат# SC_8066; РРИД: AB_2088494
Анти-Мышь Tbr2	Thermo Fisher Scientific	14-4875-82; РРИД: AB_11042577
Конфокальное программное обеспечение (Zen Black)	Микроскопия Zeiss	Zen 2.3 SP1 FP1 (черный)
Пентагидрат сульфата меди (II)	Thermo Fisher Scientific	AC197722500
Покровное покрытие	Денвилл Сайентифик	М1100-02
Плюс заряженный слайд	Денвилл Сайентифик	М1021
Фосфатно-буферный раствор (PBS)	Thermo Fisher Scientific	10010031
Super PAP Pen 4 мм наконечник	Полинауки	No 24230
Буферизованное решение Tris (TBS)	Сигма-Олдрич	Т5912
Тритон Х-100	Сигма-Олдрич	93443