Механическое повреждение сегментарных нервов личинок дрозофилы для индуцирования нейродегенерации

Аннотация

Источник: Danella, E. B., et al. Простая методология механического повреждения нейронов для изучения дегенерации моторных нейронов дрозофилы. J. Vis. Exp. (2017).

Видео демонстрирует индуцирование нейродегенерации в сегментарных нервах личинки дрозофилы через механическую травму. Вентральная кутикула личинок, находящихся под наркозом, защемляется с помощью щипцов, чтобы нанести травму сегментарным нервам. Поврежденные личинки поддерживаются пищей, что позволяет травме вызвать дегенерацию двигательных нейронов в нервах, вызывая нарушение их нервно-мышечных соединений (NMJ).

Протокол

1. Подготовка реагентов и оборудования

1. Приготовьте 1x диссекционный буфер (70 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 0,02 мМ CaCl₂, 20 мМ MgCl₂, 10 мМ NaHCO₃, 115 мМ сахарозы, 5 мМ трегалозы, 5 мМ гидроксиэтилпиперазина этансульфоновой кислоты [HEPES]; pH 7,2).
2. Приготовьте 1x фосфатно-солевой буфер (PBS).
3. Приготовьте 1x PBT, используя 1x PBS с 0,01% Triton X-100.
4. Приготовьте агаровые пластины из фруктового сока.14 Кратко смешайте 30 г агара с 700 мл H₂O и автоклав. Растворите 0,5 г метилпарабена в 10 мл этанола и добавьте раствор в 300 мл концентрата фруктового сока (виноградного или я....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Ножницы для микрорассечения	Инструменты для точной науки	15000-08
Щипцы Dumont #3	Инструменты для точной науки	11231-30	Некоторые люди предпочитают размер 3, в то время как другие предпочитают размер 5
Щипцы Dumont #5	Инструменты для точной науки	11251-30	Некоторые люди предпочитают размер 3, в то время как другие предпочитают размер 5
Воздушный бак CO2	Технологии Эйр	No ООН 1013	Можно приобрести баки различных размеров
Аппарат для обезболивания CO2	s Genesee Scientific	59-114
Штифты из нержавеющей стали, размер 0,1	Инструменты для точной науки	26002-10
SylGard 184 Силиконовый эластомер, основа и отвердитель	Индекс Dow Corning	3097358-1004 (Английский	Для заливки рассекающих пластин
Препарирующий стерео микроскоп	АмСкоп	СМ-1БЗ
источник света	АмСкоп	ХЛ150-АЙ-220В
Flystuff Премикс из виноградного сока и агара	Дженеси Сайентиал	47-102
Предметные стекла для микроскопа	Дженеси Сайентиал	Статьи 29-101
Стеклянные покровные стекла	Научный центр Фишера	Тел.: 12-545-87
Utility Box компании Thermo Scientific Nalgene	Научный центр Фишера	03-484С	Используется для создания влажной камеры для восстановления личинок

)