Method Article

Количественная оценка распределения пресинаптического белка в мозге мыши с помощью иммунофлюоресценции

July 8th, 2025

In This Article

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Источник: Wallrafen, R., et al. Количественная оценка гетерогенного распределения синаптического белка в мозге мыши с помощью иммунофлуоресценции. J. vis. Exp. (2019).

Это видео демонстрирует иммунофлуоресцентное окрашивание среза мозга мыши для количественной оценки распределения специфического пресинаптического белка. Процесс включает в себя блокирование неспецифических сайтов, применение первичных антител к белку-мишени и референсного маркера с последующим мечением вторичными антителами и ядерным контрокрашиванием. Референсный маркер обеспечивает точную количественную оценку, обеспечивая согласованный исходный уровень, а распределение пресинаптического белка по областям мозга анализируется с помощью конфокальной микроскопии.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Все процедуры, связанные с образцами животных, были рассмотрены и одобрены соответствующим комитетом по этической экспертизе животных.

1. Иммунофлюоресценция

  1. Приготовьте растворы, включающие блокирующий буфер, буфер антител, промывочный буфер 1 и промывочный буфер 2 (см. таблицу 1).
  2. Один раз промойте ломтики фосфатным буфером (PB), чтобы удалить избыток соединения оптимальной температуры резания (OCT).
    1. Удалите раствор с помощью пластиковой пипетки, не засасывая срезы мозга. Добавьте 250 μL свежего PB с помощью пипетки объемом 1000 μL.
      осторожность: ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Конфликт интересов не декларируется.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Реакционные пробирки объемом 1,5 млЭппендорф30120094
Реакционные пробирки 50 млGreiner Bio-One227261
Мультиколодец 24 лункиНаучный центр Фишера087721Ч
Пластиковая пипетка (одноразовая)Сарштедт8,61,176
Пипетка объемом 1000 млРайнин17014382
Пипетка 2 млЭппендорф3123000012
Вихревой гений 3ИКА3340001
Предметные стекла микроскопа МенцеляНаучный центр Фишера10144633CF
стереоскопЛейка
ЛСМ800ЦейссКонфокальный микроскоп
PBS (10X)Рош11666789001
Салфетка ТекСакура4583центр развертывания office
Na2HPO4БиоФрокс5155КГ001
2PO4Мерк1,06,34,60,500
Нормальная козья сывороткаМерк МиллипорС26-100МЛ
Нормальная ослиная сывороткаМеркС30-100МЛ
Тритон Х-100Мерк1,08,60,31,000
кролик анти-движительСинаптические системыРРИД: AB_10804285
морская свинка анти-СинаптофизинСинаптические системыРРИД: AB_1210382
Ослик против кролика AF647Иммуноисследования ДжексонаРРИД: AB_2492288
козий антимышиный AF488Иммуноисследования ДжексонаРРИД: AB_2337438
Мовиол4-88Кальбиохим475904
Программное обеспечение ZEN2 blueЦейссПрограммное обеспечение для микроскопии
ФиджиИзображениеJПрограммное обеспечение для анализа
Майкрософт ExcelМайкрософт

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Presynaptic ProteinImmunofluorescence StainingMouse BrainConfocal MicroscopyFluorescence IntensityPrimary AntibodiesSecondary AntibodiesNuclear CounterstainingBrain Slice PreparationImage Analysis Fiji

Related Articles