$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры с участием животных были рассмотрены местным комитетом по уходу за животными и ветеринарным советом JoVE.
1. Инъекция зрительного нерва
- Обезболить животное внутрибрюшинной инъекцией кетамина (75 мг/кг) и медетомидина (0,5 мг/кг).
заметка: После индукции анестезии наблюдайте за рефлексами отмены (щипковая проба, роговичный и глазной рефлекс и т.д.) и их отсутствие как показание к началу хирургического вмешательства. Постоянно наблюдайте за животными на протяжении всей операции и вводите дополнительный обезболивающий препарат (10% от начальной дозы кетамина на одну добавку), если рефлексы присутствуют. В экспериментах используются взрослые крысы (>12 недель).
- Побрейте кожу в области операции. Положите животное на грелку (37 °C) для поддержания температуры тела во время операции. Подготовьте кожу с помощью местного применения повидон-йода. Наложите хирургическую драпировку. Применяйте местную офтальмологическую мазь для предотвращения сухости роговицы под общим наркозом. Поддерживайте асептическую асептику с помощью стерильных инструментов.
- Сделайте разрез на коже от 1 до 1,5 см над орбитой случайно выбранного глаза. Раскройте подкожную клетчатку, чтобы добраться до полости орбиты, с помощью тонких ножниц для радужной оболочки. Вскрыть конъюнктиву и переднюю капсулу Тенона под операционным микроскопом.
- Втяните экстраокулярные мышцы и внутриглазничные слезные железы, чтобы обнажить зрительный нерв длиной примерно 3 мм. Откройте слои твердой мозговой оболочки и паутинного вещества вокруг зрительного нерва в продольном направлении с помощью офтальмологического лезвия.
- Вставьте стеклянную пипетку в зрительный нерв на расстоянии 2 мм позади глазного яблока. Стеклянная микропипетка прикреплена к шприцу Гамильтона.
- Медленно вводите 1% лизолецитин (0,4 - 1,0 μл, с 0,02% Evan's Blue, который не оказывает влияния на миелинизацию) в нерв медленно в течение примерно 30 секунд.
- Зашиваем разрез кожи. Применяйте мазь с антибиотиком для предотвращения инфицирования. Другие глаза могут служить в качестве внутреннего контроля для электрофизиологических записей.
- Положите животных на согревающую подушку, чтобы они восстановились после анестезии.