$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Краниэктомия и контролируемое воздействие коры головного мозга
- Подготовка аппарата управляемого кортикального воздействия и хирургических принадлежностей.
- Загрузите в шприц со скользящим наконечником объемом 1 мл 0,5 мл стерильного физиологического раствора для промывания раны. Прикрепите к шприцу иглу 25 G для контроля орошения.
- Приготовьте разбавленный раствор циклоспорина А (CsA) в диметилсульфоксиде (ДМСО) до конечной концентрации 1 мг/мл. Загрузите второй шприц со скользящим наконечником объемом 1 мл 0,5 мл раствора CsA для иммуносупрессии. Прикрепите к шприцу CsA иглу 25 G или больше.
- Прикрепите управляемый кортикальный ударный поршень к рычагу на стереотаксической раме и установите его под углом 15°. Прикрепите к поршню щуп ударного элемента диаметром 3 мм.
- Установите скорость удара равной 1,5 м/с и время выдержки удара 0,1 с, чтобы вызвать легкую кортикальную травму.
- Проведение односторонней краниэктомии
- Поместите мышь в индукционную камеру для анестезии, подключенную к исофурановому испарителю с источником сжатого кислорода. Индуцируйте анестезию ~3% изофлураном при концентрации кислорода ~0,7 л/мин. Проверяют глубину анестезии по отсутствию реакции на защемление пальца ноги.
- Побрейте кожу головы с помощью электрических машинок для стрижки и сотрите выпавшую шерсть.
- Поместите мышь в стереотаксическую рамку с прикрепленным носовым конусом для подачи анестетика.
- Поместите согревающую салфетку с температурой 37 °C на стереотаксическую рамку под мышью, чтобы поддерживать температуру тела под анестезией. Зафиксируйте голову на месте с помощью ушных планок и прикусочной планки и ориентируйте голову так, чтобы лобная кость черепа была горизонтальной. Поддерживайте анестезию на уровне ~1,5%-2% изофлурана в течение всей операции.
- Для выполнения предоперационного ухода и асептической хирургической подготовки нанесите на глаза офтальмологическую мазь с антибиотиком с помощью стерильного ватного тампона. Нанесите раствор на основе йода на область выбритой кожи головы. Удалите его с помощью 70% этанола. Накройте животное фенестрированной хирургической простыней так, чтобы была видна макушка головы, но глаза были закрыты.
- Сделайте разрез по средней линии (1,5-2 см) на волосистой части головы с помощью скальпеля или ножниц. Используйте стерильные ватные тампоны для очистки раны и очистки фасции слева от средней линии при брегме.
- С помощью ударного щупа определите место краниэктомии.
- Установите стереотаксическую точку отсчета (X = 0, Y = 0) в брегму. Отрегулируйте щуп сбоку на 2 мм левее средней линии. Очертите круг диаметром 5 мм вокруг зонда с помощью хирургически безопасного маркера с тонким наконечником. Поднимите и поверните ударный элемент в исходное положение.
- Используйте ручной инструмент с высокоскоростным вращающимся микромотором, чтобы сделать открытое отверстие в черепе с помощью сверла с круглым наконечником 0,6 мм или 0,8 мм с максимальной скоростью ~70%-80%. Слегка надавливайте на череп во время сверления по окружному контуру 5 мм, чтобы утончить эту границу.
- Не применяйте избыточное давление во время бурения. Вибрация, сжатие или случайное проникновение могут привести к травме коры головного мозга. Вместо этого позвольте скорости сверла выполнить свою работу.
- Не сверлите в каком-либо месте слишком долго, чтобы избежать чрезмерного нагрева черепа из-за трения. Время от времени орошайте краниэктомию стерильным физиологическим раствором, чтобы удалить мусор и уменьшить нагрев от вращающегося инструмента.
- Будьте внимательны при сверлении над линией коронкового шва, так как эти точки уязвимы для кровоизлияния.
- Используйте тонкий пинцет, чтобы удалить лоскут черепа, когда контур черепа достаточно истончен. Возьмитесь за лоскут медиально и осторожно поднимите и потяните в сторону радиальными движениями.
- Не повреждайте твердую мозговую оболочку при подъеме лоскута, это может привести к серьезным травмам и кровотечению.
- Выполните легкую контролируемую кортикальную ударную травму
- Очистите щуп ударного элемента стерильной спиртовой салфеткой. Переместите ударный щуп обратно в положение над открытой корой головного мозга. Опустите щуп до тех пор, пока он не коснется поверхности твердой мозговой оболочки. Отметьте это положение как Z = 0.
- Выведите поршень и двигайтесь на Z = -1,0 мм. Разрядите поршень так, чтобы удар по коре головного мозга.