Установление активной ВИЧ-инфекции на модели крысы

Аннотация

Источник: Li, H., McLaurin, et al. A Rat Model of EcoHIV Brain Infection. J. Vis. Exp. (2021).

Это видео демонстрирует процедуру введения химерных вирусов ВИЧ в кору головного мозга крысы, где РНК вируса интегрируется в геном хозяина, реплицируется и распространяется, чтобы установить активную ВИЧ-инфекцию в экспериментальной модели.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Стереотаксические операции вируса EcoHIV-EGFP [Ecotropic HIV Enhanced Green Fluorescent Protein]

1. Обезболить крыс с помощью 3% севофлурана. Когда крысы не реагируют на вредные раздражители и у них отсутствуют рефлексы, переходят к шагу 1.2.
2. Сбрейте волоски в области мозга и дважды простерилизуйте кожу с помощью 70% этанола и скраба на основе хлоргексидина. Закрепите крысу в положении лежа в стереотаксическом аппарате.
3. Сделайте разрез (5-6 см) через кожу головы по средней линии.
4. Отметьте две позиции сверления на расстоянии 0,8 мм сбоку, 1,2 мм от ростраль до брегмы. Просверлите отверстие (диаметр 0,4 мм) в каждой позиции черепа.
5. Залейте титруемый раствор лентивируса EcoHIV (1,04 ×^{10 6} ТЕ/мл) в инъекционный шприц объемом 10 мкл. Закрепите шприц на стереотаксическом аппарате.
6. Двигайтесь вниз по игле близко к поверхности сверлильного отверстия. Измерьте и переместите 2,5 мм в глубину.
7. Введите 1 мкл раствора вируса со скоростью 0,2 мкл/мин. Держите иглу внутри области инъекции в течение 5 мин. Медленно перемещайте иглу вверх, пока она не окажется за пределами черепа крысы.
8. Сшиваем кожу шелковой нитью 4-0
.
9. Один раз простерилизуйте надрез 70% этанолом. Подкожно вводят буторфанол (Dorolex, 0,1 мг/кг массы тела).
10. Перенесите крысу в камеру восстановления с помощью грелки, пока она не проснулась.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Антибиотико-антимикотический раствор	Селлгро	30004КИ	В 100 раз
Покровное стекло	ВВР	637-137
сверло
Ethicon Vicryl Plus Антибактериальный, 4-0 Полиглактин 910 Шовный материал, 27 дюймов. ФС-2	Мед Вет Интернэшнл	VCP422H
Шприц Гамильтона	Гамильтон	1701
Щипцы для радужной оболочки глаза	Мировые прецизионные приборы	15914
Ножницы с радужной оболочкой	Мировые прецизионные приборы	500216
Стереотаксические аппараты	Инструменты Kopf	Модель 900
Ножницы Vannas	Мировые прецизионные приборы	500086

г. глаза