$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Установление инфаркта в мосту
- Разогрейте грелку непосредственно перед анестезией.
- Прикрепите сверло для черепа к держателю на стереотаксической раме.
- Внутрибрюшинно вводите крысам 50 мг/кг кетамина и 5 мг/кг ксилазина. Проверьте отсутствие реакции на защемление пальца ноги.
- Установите крысу на стереотаксическую раму в положении лежа. Расположите ушные планки над ушным каналом, чтобы зафиксировать голову. Убедитесь, что череп находится горизонтально, чтобы избежать перекоса инъекции.
- Поддерживайте анестезию изофлураном (100% кислорода, 2,5% изофлурана) с помощью стереотаксической насадки носового конуса для крыс с входными и выходными портами. Используйте грелку для поддержания температуры на уровне 37 °C и следите за ней на протяжении всей процедуры.
- Используйте глазную мазь для предотвращения высыхания роговицы. Используйте щипцы, чтобы ущипнуть лапы, чтобы не было ни малейшей реакции на боль.
- Сбрейте волосы на черепе с помощью микробритвы. Круговое нанесение хирургического скраба с хлоргексидином, начиная с места хирургического разреза и вращаясь наружу.
- Сделайте скальпелем разрез по средней линии на 3 см от линии двустороннего бокового кантуса до 0,5 см за задним родничком, который следует отметить хирургическим маркером.
- С помощью ватного тампона удалите кровь.
- С каждой стороны кожного лоскута следует положить кусок хирургической ленты, чтобы обнажить кожу головы (Рисунок 1).
- Аккуратно удалите соединительные ткани из кости черепа ватным тампоном, смоченным в 0,9% NaCl. Если его не удалить, соединительные ткани попадут в бормашину.
- Определите брегму. Выберите центральную точку брегмы в качестве исходной точки и отметьте ее черным хирургическим маркером с тонким наконечником.
- Установите сверло на 6,0 мм AP, 2,0 мм ML (диапазон от 0,5 до 3,0 мм, рис. 2A).
- Выполните трепанацию черепа (диаметр 1 мм) с помощью автоматического сверла. Действуйте осторожно, потому что эта точка находится близко к венозному синусу.
- Снимите дрель со стереотаксической рамы.
- Поместите пробник 22 G с изолированной оболочкой в стереотаксическую рамку (рисунок 3A). Наконечник зонда должен быть расположен на 2 мм выше проксимального конца тубуса (рис. 3A, B; Рисунок 2В).
- Убедитесь, что оболочек входит в мозг на 7 мм (7 мм DV, рисунок 2B; Рисунок 1С).
- Продвигайте зонд вдоль тубуса (рисунок 1D) до тех пор, пока кончик зонда не окажется на 9 мм ниже поверхности мозга (рисунок 2D).
- Подключите электроды к электростимулятору (рисунок 3C). Подсоедините анод к щупу, как показано на рисунке 1D. Подключите катод к крысам (обычно к уху крыс).
- Включите электростимулятор и настройте следующие параметры: длительность одиночного импульса = 4050 мс; напряжение = 50 В; и ток = 4 мА (рис. 3C). Во время электрической стимуляции крыса будет дрожать. В этом исследовании устройство не было включено для крыс контрольной группы, используемых для поведенческих тестов, МРТ и ТТС.
- Оставьте зонд на месте на 5 минут после стимуляции.
- Извлеките зонд из мозга (рисунок 1F).
- Используйте костный цемент для покрытия трепанации черепа. Дайте цементу высохнуть перед наложением швов на рану.
- Сшить рану полиамидными нитями 4-0. После трех-четырех швов завяжите 2-1-1 стандартные хирургические узлы.
- Внутрибрюшинно вводите крысам пенициллин (0,25 мл, 80 МЕ, разведенные в 4 мл физиологического раствора) для предотвращения инфекции.
- Подкожно вводите крысам мелоксикам в дозе 2 мг/кг, а затем повторяйте его каждые 24 ч.
- Следите за крысами каждые 15 минут до полного пробуждения и возвращайте их в клетку с помощью грелки. Обеспечить свободный доступ к пище и воде до жертвоприношения.
заметка: Все процедуры должны соответствовать принципам асептической хирургии. Перед операцией наденьте скраб, хирургическую маску и стерильные перчатки после хирургического скраба рук. Всегда поддерживайте стерильный шовный материал в стерильном поле.
