Выполнение лазерно-индуцированной черепно-мозговой травмы на модели крысы

Аннотация

Источник: Kuts, R., et al. Лазер-индуцированное повреждение головного мозга в моторной коре крыс. J. Vis. Exp. (2020)

Это видео демонстрирует процедуру создания точного, контролируемого повреждения головного мозга в моторной коре крысы с помощью лазера.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Экспериментальная процедура лазерной травмы головного мозга

1. Обезболите крысу смесью 2% изофлурана в кислороде, что обеспечит спонтанную вентиляцию легких. Проверьте достаточную глубину анестезии, зажав хвост щипцами, чтобы увидеть, отсутствует ли рефлекс отмены.
2. Используя ректальную грелку с регулируемой температурой, поддерживайте температуру тела крысы на уровне 37 °C на протяжении всей экспериментальной процедуры.
3. Удалите локальные волосы с помощью бритвы и продезинфицируйте их 70% спиртом и 0,5% глюконатом хлоргексидина. Повторите этап дезинфекции еще два раза.
   ПРИМЕЧАНИЕ: Ширина хирургического разреза должна составлять примерно 3 см. Удалите волосы не менее чем на 2 см вокруг области разреза.
4. Поместите крысу на стереотаксический держатель головы в положении лежа. Сделайте разрез 3 см, чтобы отразить кожу головы в сторону, и обнажите область между брегмой и лямбдой.
5. Поддерживайте анестезию через носовой конус.
6. С помощью неодимового лазера YAG (Nd-YAG) (пиковая длина волны 1064 нм) вводите 50Дж X 10 точек с длительностью импульса 1 с в открытую область черепа над правым полушарием.
7. Убедитесь, что лазерная генерирующая часть устройства находится на расстоянии 2 мм от зоны воздействия для получения лазерного луча. 50Дж X 10 точек были выбраны после тщательной оценки различных комбинаций энергии/поверхности. Эта комбинация эффективна и не вызывает разрушения костей черепа после введения менее чем на секунду.
   ПРИМЕЧАНИЕ: 2 мм – это расстояние между выводом лазерного луча (от оптического кабеля он пропускается) и костью черепа. В случае, если используется фокусирующая линза, расстояние должно быть рассчитано с учетом угла наклона линзы для фокусировки луча в нужной области повреждения. Обеспечьте надлежащую безопасность при использовании лазерного устройства, включая соответствующую подготовку и защиту глаз.
8. Выньте крысу из аппарата и закройте кожу головы шелковыми хирургическими швами 3-0
.
9. Прекратите анестезию и верните крысу в клетку для восстановления. Введите 0,1 мл 0,25% бупивакаина местно для уменьшения послеоперационной боли сразу после операции.
   заметка: При правильном выполнении вся процедура должна длиться менее 5 минут.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Матрицы мозга и тканей	СИГМА - ОЛДРИЧ	15013
Цифровые весы	СИГМА - ОЛДРИЧ	Рупия 4000
Этанол 96 %	РОМИЧЕСКИЙ		Легковоспламеняющаяся жидкость
Обогреватель с термометром	Грелка-1	Модель: ГРЕЛКА-1/2
Инфузионная манжета	АБН	ИП-500
Изофлуран, USP 100%	Пирамамал Критик Карет, Инк	НДЦ 66794-017
Лезвия скальпеля 11	СИГМА - ОЛДРИЧ	С2771
Лазерный станок Sharplan 3000 Nd:YAG (иттрий-алюминиевый гранат, легированный неодимом)	Лазер Индастриз Лтд
Стереотаксический держатель головки	КОПФ	900ЛС