Иммунофлуоресцентное окрашивание сиалогликопротеинов в нейральных прогениторных клетках и нейронах

Аннотация

Источник: Bai, Q., et al., Идентификация маркеров клеточной поверхности первичных нейральных стволовых и прогениторных клеток с помощью метаболического мечения сиалогликана. J. Vis. Exp. (2019)

Это видео демонстрирует биотинилирование и флуоресцентное мечение модифицированных сиалогликопротеинов в первичных нейральных стволовых и прогениторных клетках, а также нейронах, а также их визуализацию с помощью флуоресцентной микроскопии.

Протокол

1. Иммунофлуоресцентное окрашивание сиалогликопротеинов в расширенных первичных НСПК и дифференцированных нейронах

1. Приготовьте комплекс BTTAA-CuSO₄ 1 30x stock, содержащий 1,5 мМ CuSO₄ и 9 mM BTTAA в воде двойной дистилляции. Приготовьте свежеконъюгированный биотин-конъюгированный буфер 1, содержащий 50 мкМ биотин-алкина, 2,5 мМ аскорбата натрия и 1x комплекс BTTAA-CuSO₄ в PBS.
2. Извлеките вкладыши из планшетов для совместного культивирования. Отсадите питательную среду из донных лунок и промойте нервные клетки один раз предварительно подогретым PBS.
3. Отсасывайте PBS из лунок. Добавьте в я....

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Фетальная бычья сыворотка	Gibco	10099141	10%
Параформальдегид	сигма	158127	4%
DAPI	Gibco	No 62248
6-луночный планшет	Корнинг	No 3335
Мышиный моноклональный анти-Нестин	Исследование развития Банк гибридома	Крыса-401	от 1 до 20
Мышиный моноклональный анти-бета-тубулин III	сигма	Т8860	1 к 1000
Alexa Fluor 488 козий антимышиный IgG1	Инвитроген	А-21121	1 к 1000
Alexa Fluor 546 козий антимышиный IgG2b	Инвитроген	А-21143	1 к 1000
Тритон Х-100	Амреско	Номер 694
Медный купорос	сигма	209198
Алкин-биотин	Нажмите «Инструменты химии	ТА105
БТТАА	Нажмите «Инструменты химии	1236
Аскорбат натрия	сигма	А4034
Alexa Flour 647-конъюгированный стрептавидин	Инвитроген	С21374	1 к 1000

» » г.