Индукция микрокровоизлияний в мозг на модели крысы с помощью липополисахарида

Аннотация

Источник: Li, D., et al. Подострые микрокровоизлияния в мозг, вызванные инъекцией липополисахаридов у крыс. J. Vis. Exp. (2018).

Это видео демонстрирует процесс индуцирования разрушения гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) и микрокровоизлияний в мозг на модели крысы с использованием липополисахарида (ЛПС). В нем выделяется последовательность иммунных реакций, которые приводят к повышению проницаемости ГЭБ и последующему повреждению тканей мозга.

Протокол

Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.

1. Материалы

1. Приготовление инъекции ЛПС
   1. Добавьте 25 мл дистиллированной воды к 25 мг порошка ЛПС, полученного из Salmonella typhimurium, до конечной концентрации 1 мг/мл. Хранить инъекцию в стерильной пробирке при температуре 4 °C.
      осторожность: ЛПС токсичен.

2. Животные

1. Введение ЛПС самцам крыс Спрэг-Доули (SD) в возрасте 10 недель (средний вес: 280 ± 20 г) путем внутрибрюшинной инъекции.
   осторожность: Если крысы приобретаются у другой организации, то адаптационная фаза не должна быть меньше 7 дней.

3. Впрыски LPS

1. Внутрибрюшинно ввести ЛПС каждой крысе в дозе 1 мг/кг и вернуть крыс в их домашнюю клетку.
   заметка: Анестезия не требуется.
2. Через шесть часов введите крысам ту же дозу инъекции ЛПС.
3. Через шестнадцать часов введите крысам ту же дозу ЛПС><. осторожность: Введение крысам SD ЛПС в дозе 1 мг/кг может привести к 5% смертности. Уровень смертности может еще больше увеличиться у молодых или старых крыс или беременных самок крыс.
4. Верните крыс в клетки после инъекции ЛПС и обеспечьте им свободный доступ к пище и питью.
   заметка: У крыс будет проявляться отчетливая системная воспалительная реакция, и поэтому клетки должны оставаться чистыми на протяжении всего эксперимента. Крысы должны часто (2 раза в день) контролироваться на предмет веса, общего вида и поведения после первой инъекции ЛПС. Если у крыс начинает проявляться сгорбленная осанка, нежелание двигаться, значительная потеря веса (>20%) или окрашивание порфирином, их следует гуманно усыпить до 7-дневной конечной точки исследования.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
ЛПС	Сигма-Олдрич	Л-2630	для индукции воспаления
Фосфатный буферный раствор (PBS)	Соларбио	П1022	Разновидность буферного раствора, обычно используемого в эксперименте