$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Все процедуры, связанные с животными, были проверены местным институциональным комитетом по уходу за животными и ветеринарным наблюдательным советом JoVE.
1. Установление нейропатии Resiniferatoxin (RTX)
ВНИМАНИЕ: RTX нейротоксична и опасна. При контакте он действует как раздражитель для глаз, слизистых оболочек и верхних дыхательных путей. Избегайте вдохов и надевайте лабораторные очки и халаты во время подготовки к RTX. Смойте большим количеством воды при попадании на кожу или после контакта с ней.
- Добавьте 1 мг порошка RTX в смесь объемом 200 μL равного объема Tween 80 и абсолютного этанола (100 μL на каждый растворитель).
- Аквотируйте раствор RTX (12 μл/флакон) и храните его при температуре -20 °C до 3 месяцев. Это и есть акции RTX; Выбросьте оставшееся решение RTX по истечении срока действия.
- Разбавьте исходную массу RTX обычным физиологическим раствором до конечного объема 600 μл. Конечная концентрация раствора RTX должна составлять 0,01%, что равно 1 мкг RTX в 10 мкл автомобильного раствора.
- В качестве экспериментальных животных использовали 8-недельных взрослых самцов мышей ICR (35-40 г) и вводили мышам однократную дозу раствора RTX (дозы: 200, 50 и 10 мкг/кг, соответственно) внутрибрюшинным (в/в) с помощью микроинъекционного шприца. Мышей анестезировали ингалятором с 5 % изофлураном для глубокой анестезии. Если у мышей наблюдалось оттягивающее действие конечностей во время инъекции RTX, мышам следует дольше вдыхать анестезию.
Пример: Если мышь весит 40 г, то она получит 20 мкл раствора RTX, что соответствует дозе 50 мкг/кг.
- Дайте одной группе мышей равное количество носителя (10% Tween 80 и 10% абсолютного этанола в физиологическом растворе) в качестве контроля.
- После инъекции RTX верните мышей в пластиковую клетку на 12-часовой световой / 12-часовой темной цикл и дайте пищу и воду в неограниченном количестве.