Техника нанесения закрытой черепно-мозговой травмы у мух дрозофил

Аннотация

Источник: Сан, М., и др. Новый метод моделирования хронической травматической энцефалопатии у дрозофилы. J. Vis. Exp. (2017).

Это видео демонстрирует процедуру нанесения закрытой черепно-мозговой травматической травмы у мух дрозофилы, находящихся под наркозом, с помощью ударного устройства с газовым ударным механизмом. Травма влияет на функцию нейронов и ухудшает способность ходить.

Протокол

1. Сборка ударного устройства (Рисунок 1)

1. Извлеките поршень из туберкулинового шприца объемом 1 мл. Разрежьте ствол на отметке 1 мл.
2. Снимите аэрозольный барьер (высота 3 мм x диаметр 4 мм) с наконечника пипетки объемом 200 мкл и используйте его в качестве ударного элемента. Поместите ударный элемент внутрь цилиндра шприца. Осторожно постучите по стволу, чтобы переместить импактор к концу кончика, при этом плоская сторона будет закрывать отверстие сопла.
3. Прикрепите конец кончика бочки к пластиковой трубке, которая подключена к регулятору потока углекислого газа (CO₂) станции анестезии дрозофилы.
4. Держите ствол вертикально и прижмите его к стандартной стойке для держателя хомута так, чтобы импактор оставался на дне ствола.
5. Модифицируйте наконечник пипетки объемом 200 мкл, чтобы сделать держатель для мух.
   1. Отрежьте 4 мм от кончика, чтобы сделать отверстие диаметром 0,8 мм, позволяющее обнажить только головку мухи.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Грудная клетка и все остальные части тела мухи останутся внутри наконечника пипетки.
6. Модифицируйте наконечник пипетки объемом 1 000 мкл и колпачок иглы шприца объемом 1 мл, чтобы получить соединитель.
   1. Отрежьте 44 мм от отверстия кончика. Возьмите колпачок иглы шприца длиной 1 мл длиной 6 мм и плотно вставьте его в оставшийся сегмент наконечника пипетки объемом 1 000 мкл.

2. Работа ударного устройства

1. Обезболите одну 2-дневную взрослую самку мухи с помощью CO₂ на площадке для мух.
2. Аккуратно перенесите его на держатель для мух с помощью тонкой кисточки. Осторожно постучите по держателю так, чтобы головка мухи была видна за пределами кончика. Если хоботок от мухи обнажен за пределами кончика, аккуратно заправьте его обратно внутрь наконечника с помощью затупленной иглы для шприца объемом 1 мл.
   заметка: Убедитесь, что хоботок от мухи находится внутри держателя. В противном случае муха может погибнуть от сосущей травмы хоботка.
3. Затяните держатель мухи на цилиндре шприца с помощью коннектора так, чтобы головка мушки была обращена вниз.
4. Установите давление газа на 100 кПа. Отрегулируйте скорость потока в соответствии с планом эксперимента.
5. Быстро включайте и выключайте тумблер регулятора расхода так, чтобы ударный элемент попал в головку мухи один раз.
6. Поднимите держатель для мух и переместите его над нахлыстовой площадкой. Переверните держатель для мух и осторожно постучите по стороне, чтобы выпустить муху. Оставьте муху в пустом флаконе для восстановления.

Результаты

Рисунок 1. Схема ударного устройства. В устройстве использовались материалы, которые легко доступны в лаборатории дрозофилы: 1) наконечник для пипетки объемом 200 мкл, 2) туберкулиновый шприц объемом 1 мл, 3) ударный механизм, 4) соединительная трубка, подключенная к станции анестезии дрозофилы, и 5) соединитель для затягивания наконечника на шприце

.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье

Имя	Компания	Каталожный номер	Комментарии
Аэрозольный барьер	США Сайентифик	1120-8810 (Английский)	Используется в качестве ударного элемента
Наконечник для пипетки 200 мкл	США Сайентифик	1111-0706 (Английский)	Используется в качестве держателя головки мухи
1000 мкл Наконечник для пипетки	США Сайентифик	1122-1830	Используется в качестве коннектора
1 мл туберкулинового шприца	Бектон Дикинсон	309625
Чашки Петри 60 мм	Научный центр Фишера	FB0875713A	Используется в качестве трекинговых арен
Регулятор расхода	Дженеси Сайентиал	59-122WC
Стандартный зажимодержатель/подставка	EISCO Scientific	СН0688
Тонкая кисть	Дженеси Сайентиал	59-204
Флайпад	Дженеси Сайентиал	59-114

гг.